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第八章 RNA的转录合成 RNA Biosynthesis Transcription 8.1 概述 分子生物学最基本的原理是：基因是唯一能够自主复制、永久存在的遗传单位，其生物学功能是以蛋白质的形式表达出来的 DNA序列是遗传信息的贮存者，它通过自主复制得到永存，并通过转录生成信使RNA、翻译生成蛋白质的过程来控制生命现象 8.1 概述 转录（transcription）：指拷贝一条与DNA链序列完全相同（除了T→U之外）的RNA单链的过程 基因表达的核心步骤 翻译（translation）：指以新生的mRNA为模板，把核苷酸三联遗传密码子翻译成氨基酸序列、合成多肽链的过程 基因表达的最终目的 8.1.1 一般特点 体外两条链均可转录 体内仅有一条链转录 与mRNA序列相同的那条DNA链称为编码链(coding strand)、+链或称有意义链(sense strand)、Crick链 另一条根据碱基互补原则指导mRNA合成的 DNA链称为模板链(template strand)或称-链、反义链(antisense strand) 、Watson链 8.1.2 真核和原核基因转录的差异 8.1.3 主要阶段 模板识别 转录起始 通过启动子 转录的延伸 终止 模板识别 RNA聚合酶与启动子DNA双链相互作用并与之相结合的过程 启动子：基因转录起始所必需的一段DNA序列 转录起始前，启动子附近的DNA双链分开形成转录泡以促使底物核糖核苷酸与模板DNA的碱基配对 转录起始 RNA链上第一个核苷酸键的形成 通过启动子 转录起始后直到形成9个核苷酸短链是通过启动子阶段 此时RNA聚合酶一直处于启动子区，新生的RNA链与DNA模板链的结合不够牢固，很容易从DNA链上掉下来并导致转录重新开始 一旦RNA聚合酶成功地合成9个以上核苷酸并离开启动子区，转录就进入延伸阶段 通过启动子的时间代表启动子的强弱，时间越短，该基因转录起始的频率越高 转录的延伸和终止 RNA聚合酶离开启动子沿RNA链移动并使新生RNA链不断伸长的过程就是转录的延伸 当RNA链延伸到转录终止位点时，RNA聚合酶不再形成新的磷酸二酯键，RNA－DNA杂合物分离，转录泡瓦解，DNA恢复双链状态，而RNA聚合酶和RNA链都被从模板链上释放出来，这就是转录的终止 8.2 模板和酶 Templates and Enzymes 8.2.1 转录模板 不对称转录 asymmetric transcription 在DNA分子双链上某一区段，一股链用作模板指引转录，另一股链不转录 模板链并非永远在同一条单链上 8.2.2 RNA聚合酶 RNA polymerase 大肠杆菌RNA聚合酶的组成分析 E.coli 中不同的σ因子 RNA pol 执行多功能 识别DNA双链上的启动子 使DNA变性在启动子处解旋成单链 通过阅读启动子序列，RNA pol确定它自己的转录方向和模板链 最后当它达到终止子时，通过识别停止转录 真核生物的RNA聚合酶 真核生物RNA聚合酶的共同特征 3种聚合酶都由2个大亚基、12个以上的小亚基组成 在3种聚合酶之间，最大2个亚基、至少5个小亚基的基因编码区具有同源性；4-7种小亚基为各种RNA聚合酶特有 都具有原核RNA 聚合酶核心α2ββ?同源的亚基 最大亚基与β?相似，次最大亚基与β相似 真核生物RNA 聚合酶II （RNA Pol II） 与模板结合；与转录起始、延伸有关 与DNA、底物和新生的RNA结合 负责酶的装配 作用 CTD磷酸化对调控基因转录有重要作用： （1）CTD去磷酸化，RNA聚合酶II易与DNA 结合，这种构象适于转录的起始； （2）CTD磷酸化可使RNA聚合酶II与DNA的 结合变得松弛，形成适于延伸的构象 模板上酶的辨认、结合 原核生物一个转录区段可视为一个转录单位，称为操纵子(operon)，包括若干个结构基因及其上游(upstream)的调控序列 典型启动子的结构 -35 -10 转录起点 TTGACA 16-19bp TATAAT 5-9bp Ⅱ类启动子和调控区 TATA框 核心元件 启始子（initiator，Inr）:一般由PY2CAPY5构成， 位于-3～+5 ，可能提供RNA pol Ⅱ