全血硫胺素及其衍生物的高效液相色谱检测方法的建立-检验医学.PDF

检验医学２０１２年５月第２７卷第５期　ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｍａｙ２０１２，Ｖｏｌ２７．Ｎｏ５． ·３３１· 文章编号：１６７３８６４０（２０１２）０５０３３１０５　　　中图分类号：Ｑ５６３　　　文献标志码：Ａ 全血硫胺素及其衍生物的高效液相色谱检测方法的建立 １ ２ １ 费国强 ，　李晓鸽 ，　钟春玖 （１．复旦大学附属中山医院，上海２０００３２；２．中科院上海有机化学研究所，上海２０００３２） 　　摘要：目的　建立一种稳定、快捷的全血硫胺素及其磷酸酯衍生物高效液相色谱（ＨＰＬＣ）荧光检测方法。方 法　全血样本经三氯乙酸（ＴＣＡ）去蛋白处理、铁氰化钾衍生，产生能被ＨＰＬＣ反向柱子经梯度洗脱分离的稳定 荧光产物，通过荧光检测并与硫胺素及其磷酸酯衍生物标准样本比对，来确定人体全血硫胺素含量。方法通过 线性方程、提取率、重复性等指标验证。结果　经过检测，焦磷酸硫胺素（ＴＤＰ）、单磷酸硫胺素（ＴＭＰ）和硫胺素 的检测限分别为８．０、１．５和２．５ｎｍｏｌ／Ｌ，信噪比（Ｓ／Ｎ）＞１０，能够满足临床需要。线性趋势良好，ｒ＞０．９９。硫胺 素、ＴＭＰ及ＴＤＰ的回收率分别为１０３．７％、９６．８％、１０１．７％，重复性好，变异系数（ＣＶ）＜１０％。结论　经ＴＣＡ去 蛋白、铁氰化钾衍生、梯度洗脱建立的荧光ＨＰＬＣ检测硫胺素及其磷酸酯衍生物衍生物的方法可靠，可用于临床 检测。 关键词：硫胺素；铁氰化钾；高效液相色谱 １ ２ 　　ＨＰＬＣｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｉａｍｉｎｅａｎｄｉｔｓｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓｉｎｈｕｍａｎｗｈｏｌｅｂｌｏｏｄ　ＦＥＩＧｕｏｑｉａｎｇ，ＬＩＸｉａｏｇｅ， １ ＺＨＯＮＧＣｈｕｎｊｉｕ．　（１．ＺｈｏｎｇｓｈａｎＨｏｓｐｉｔａｌ，ＦｕｄａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０００３２，Ｃｈｉｎａ；２．ＳｈａｎｇｈａｉＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆ ＯｒｇａｎｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０００３２，Ｃｈｉｎａ） 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｓｔａｂｌｅａｎｄｒａｐｉｄｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆｈｕｍａｎｗｈｏｌｅｂｌｏｏｄ ｔｈｉａｍｉｎｅａｎｄｉｔｓｐｈｏｓｐｈａｔｅｅｓｔｅｒｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓｂｙｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ａｆｔｅｒ ｂｌｏｏｄｐｒｏｔｅｉｎｓｗｅｒｅｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅｄｂｙｔｒｉｃｈｌｏｒｏａｃｅｔｉｃａｃｉｄ（ＴＣＡ），ｔｈｉａｍｉｎｅａｎｄｉｔｓｐｈｏｓｐｈａｔｅｅｓｔｅｒｓｗｅｒｅｄｅｒｉｖａｔｉｚｅｄｕｓｉｎｇ ｐｏｔａｓｓｉｕｍｆｅｒｒｉｃｙａｎｉｄｅｉｎｔｏｔｈｉｏｃｈｒｏｍｅｓ．Ｔｈｅｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓｏｆｔｈｉａｍｉｎｅａｎｄｉｔｐｈｏｓｐｈａｔｅｅｓｔｅｒｓｗｅｒｅｓｅｐａｒａｔｅｄｂｙａ ｒｅｖｅｒｓｅｄｐｈａｓｅＨＰＬＣｃｏｌｕｍｎａｎｄｍｅａｓｕｒｅｄｂｙｆｌｕｏｒｏｓｃｏｐｅ．Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓｖａｌｉｄａｔｅｄｂｙｔｈｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｌｉｎｅａｒｉｔｙ， ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒａｔｉｏａｎｄｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅｌｏｗｅｒｌｉｍｉｔｓｏｆｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｂｌｏｏｄｔｈｉａｍｉｎｅｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ＴＤＰ）， ｔｈｉａｍｉｎｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ＴＭＰ）ａｎｄｔｈｉａｍｉｎｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｓｗｅｒｅ８．０，１．５ａｎｄ２．５ｎｍｏｌ／Ｌｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｓｉｇｎａｌｔｏ ｎｏｉｓｅｒａｔｉｏ（Ｓ／Ｎ）ｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｔｈｉａｍｉｎｅａｎｄｉｔｓｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓｗａｓ＞１０．Ｔｈｅｌｉｎｅａｒｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｗａｓｓｔａｂｌｅ（ｒ＞０．