芥菜开花整合子soc1的启动子克隆及其官与flc svp蛋白相互作用.docxVIP

研究生优秀毕业论文 西南大学硕士学位论文3．2．3引物设计 西南大学硕士学位论文 3．2．3引物设计 ．．21 3．2．4 SOCl启动子的克隆与序列分析 ．21 3．3结果与分析 ．25 3．3．1芥菜基因组DNA的电泳检测 25 3．3．2 SOCl启动子的克隆 25 3．3．3芥菜SOCl启动子的生物信息学分析 27 3．4小结 ．29 第4章芥菜SOCl启动子与FLC、SVP蛋白的相互作用 31 4．1材料 ．31 4．1．1菌株及载体质粒 ．．3 1 4．1．2实验试剂 ．．3 1 4．1．3主要实验仪器 ．．3 1 4．2方法 3 1 4．2．1实验试剂的配制 一31 4．2．2 SOCl启动子亚克隆的引物设计 ．32 4．2．3 SOCl启动子的亚克隆 32 4．2．4 SOCl启动子酵母表达载体的构建 ．33 4．2．5酵母感受态制备和转化 ．．35 4．2．6酵母菌株AbA抗性浓度的筛选 36 4．2．7 SOCl启动子与SVP、FLC蛋白相互作用检测 37 4．3结果与分析 ．37 4．3．1本实验先期工作 一37 4．3．2酵母表达载体的鉴定 ．．38 4．3．3酵母菌株AbA抗性浓度的筛选 39 4．3．4SOCl的启动子与FLC、SVP蛋白相作鉴定 40 4．3．5相互作用区域的预测 41 4．4，J、结 ．42 第5章讨论 43 5．1 SOCl启动子的特征 43 5．2酵母单杂交系统对SOCl启动子与FLC、SVP蛋白相互作用的探讨 ．43 5．3 SOCI启动子与FLC、SVP蛋白作用区域的探讨 44 第6章结论 45 6．1获得芥菜开花整合子SOCl的启动子 ．．45 6．2成功构建了SOCl启动子酵母单杂交重组表达载体 ．．45 6．3 SOCl启动子与FLC、SVP蛋白能够相互作用 45 6．4 SOCI启动子的3个CArG．box很可能与FLC、SVP蛋白相互作用 45 参考文献 47 附勇乏 ．54 致谢 ．55 在学期间发表文章 57 在读期间参与的科研项目 59 万方数据 摘要芥菜开花整合子SOCl的启动子克隆及其与 摘要 芥菜开花整合子SOCl的启动子克隆及其与 FLC、SVP蛋白相互作用 蔬菜学硕士研究生赵夏云 指导老师汤青林研究员 摘要 适宜的开花时间对于植物的生殖生长及其产品器官的产量和品质非常重要， 因此植物进化出复杂且精细的调控机制来调控开花时间。芥菜(Brassica juncea Coss)是十字花科芸薹属蔬菜，起源于亚洲，在我国南方大面积种植。因此，芥 菜开花时间基因调控网络的研究，对于生产指导和科学研究都有非常重要的意义。 近30年对模式植物拟南芥基因的研究表明开花遗传调控网络由6个途径相互作用 调控：光周期途径，自主途径，春花途径，赤霉素途径，环境温度途径，年龄途 径。这六个途径主要由一些开花整合子基因调控，这些基因编码不同的蛋白，通 过整合多个途径中的信号从而调控开花时间，例如开花信号整合子SUPPRESSOR OF 0PEIRE艘R巴孓S!，DⅣOF CONSTANSJ『(SOCI)，它能够整合低温春化途径核心调 控因子FLOWERING LOCUS C(FLC)和光周期途径核心调节因子SHORT VEGETATIVE PHASE(S阡)的开花信号。但是，芥菜SOCl基因是否受到FLC 和SVP蛋白的转录调控?FLC和SVP蛋白能否直接结合到SOCl基因启动子上， 抑制SOCl基因的表达?目前并不清楚。 本试验以芥菜为研究材料，根据SOCl己知基因序列设计特异性引物，利用染 色体步移法克隆出SOCl的启动子，并且利用生物信息学分析启动子的关键调控元 件。构建SOCl启动子及SVP、FLC的酵母单杂交重组表达载体，通过酵母单杂 交系统进一步鉴定及分析SOCl启动子与SVP、FLC蛋白相互作用，以期为SOCl 基因的转录调控等深入研究奠定基础。 1、SOCl启动子的克隆及生物信息学分析 提取芥菜基因组DNA，根据芥菜SOCl己知基因序列设计特异性引物，利用 染色体步移法从芥菜gDNA中克隆出未知SOCl启动子序列。获得的SOCl启动 子为782bp，进化分析表明芥菜SOCl的启动子与拟南芥SOCl的启动子关系最近， 与高山南芥SOCl的启动子亲缘关系最远。对其顺式元件生物信息学分析发现，该 万方数据 西南大学硕士学位论文序列中含有TATA—box核心启动子元件、CAAT-box等上游启动子元件以及多种应 西南大学硕士学位论文 序列中含有TATA—box核心启动子元件、CAAT-box等上游启动子元件以及多种应 答元件。 2、SOCl的启动子克隆与FLC、SVP蛋白相互作用的检测 设计带有HindlII／XhoI酶切位点的引物