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第十二章 DNA的复制、修复及重组DNA技术; ? 分子生物学的中心法则(central dogma) DNA RNA 蛋白质;第一节 DNA复制的几个基本原则（特点） 一 、半保留复制（semiconservative replication） ;;5;二、半不连续复制 （semidiscontinuous replication） 1、 体内仅存在5’ 3’的DNA聚合酶 2、 前导链与随从链（岗崎片段） ;5’;前导链（leading strand）： DNA复制时，一股以3’ 5’方向的母链作为模板，指导新合成的链以5’ 3’方向连续合成的链称为前导链。 （复制方向与解链方向一致）;随从链（lagging strand): DNA复制时，一股以5’ 3’方向的母链作为模板，指导新合成的链沿5’ 3’合成，1000—2000个核苷酸不连续的小片段的链称为随从链。 （复制方向与解链方向相反);岗崎片段（Okazaki）： DNA复制时，一股??5’ 3’方向的母链作为模板，指导新合成的链沿5’ 3’合成1000—2000个核苷酸不连续的小片段称之为岗崎片段。 岗崎片段由DNA连接酶连成一条完整的新链。;? ? 半不连续复制： 在DNA复制过程中， 亲代DNA分子中以3’ 5’方向的母链作为模板指导新的链以5’ 3’ 方向连续合成， 另一股以5’ 3’ 为方向的母链则指导新合成的链以 5’ 3’方向合成1000—2000个核 苷酸长度的许多不连续的片段（岗崎片段）， 这种复制方式称之为半不连续复制。 ;三、RNA引物;5’;四、复制的真实性 DNA的半保留复制 遵守严格的碱基配对规律 RNA引物 DNA聚合酶在复制延长中对碱基的选择功能 复制出错是有即时的校读功能(3’ 5’ 外切酶功能） DNA损伤的修复机制 ;第二节 参与DNA复制的一些酶类和蛋白质;酶和蛋白质因子 DNA聚合酶Ⅲ/Ⅰ DNA解链酶 DNA结合蛋白(SSB） 拓扑异构酶Ⅰ/Ⅱ 引发体 DNA连接酶;一、大肠埃希菌DNA聚合酶（原核生物）  ;DNA聚合酶Ⅰ 多功能酶 5’ 3’外切酶 3’ 5’外切酶 5’ 3’聚合酶 单链多肽 大小二个片段 切除RNA引物， 填补空缺 损伤后修复 ; 3’ 5’ 5’ 3’ 外切酶 聚合酶;DNA聚合酶Ⅲ全酶（DNA Polymerase Ⅲ holoenzyme）;21;二、真核细胞的DNA聚合酶;三、解链、解旋酶类;拓扑异构酶Ⅰ（topoisomerasⅠ） 转轴酶 拓扑异构酶Ⅱ 旋转酶 （gyrase） ;四、引发体（primosome）;26;五、DNA连接酶;缺口填补: 连接双股DNA分子中一链的缺口 双链DNA分子中双链的缺口 不能连接二分子单链DNA ;;第三节 DNA复制过程(起始、延长、终止）;原核生物 双向复制 （θ型复制） 特定起始点：oriC;大肠埃希菌复制起始点oriC的结构; 原核生物双向复制（θ型复制）;真核生物复制泡（复制起始点+复制叉）;DNA双链复制起始点;二.复制的延长 1.在DNA聚合酶Ⅲ的作用下， 2.前导链合成1000-2000个核苷酸后， 3.随从链开始合成，岗崎片段的长度 为1000-2000个（大肠杆菌）  4. PolⅢ为不对称二聚体， 一个作用于前导链， 另一个作用于随从链(loop)。 ;37;5’;;三、复制的终止; ;四、端粒DNA的复制;线形DNA复制末端问题;2.端粒酶（telomerase) ----防止端粒缩短的酶 组成 蛋白质(DNA聚合酶)+RNA(合成端粒DNA的模板) 唯一携带RNA模板的逆转录酶 人端粒酶: 模板(RNA-端粒酶):3’-CAAUCCCAAUC-5’ 合成(DNA): 5’---AGGGTT---3’ 端粒酶和衰老、肿瘤有关 ;DNA末端;4.以延长的DNA单链为模板, 3’-OH为引物合成富含C的 互补链;;;一.造成损伤的原因;二.DNA损伤类型;缺失 插入 倒位;三.修复机制;切除修复 1. UV特异核酸内切酶切除 DNA聚合酶Ⅰ填补、修复 DNA连接酶连接 2. 人体重要的修复方式 3.缺乏UV特异核酸内切酶 —— 着色性干皮病;4