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定向基因改造设想 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切割点上切割DNA分子。具有专一性 常用的运载体： 质粒、噬菌体和动植物病毒等 四、基因工程的基本操作 1、目的基因的获取 1、目的基因的获取 基因文库 四、基因工程的基本操作 限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是 —G↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。 ①请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。 ②请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。 ③在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来？为什么？ 第一步：获取目的基因 目的基因与运载体结合 带目的基因的DNA 质粒与目的基因黏性末端相同 带目的基因的重组质粒 DNA连接酶 质粒 相同限制酶切割 DNA重组 2、运载体的构建 3、目的基因导入受体细胞 （1）将目的基因导入植物细胞 （2）将目的基因导入动物细胞 （3）将目的基因导入微生物细胞 常用农杆菌转化法 常用显微注射法 常用大肠杆菌转化 体细胞 受精卵 用Ca2＋处理细胞 （1）将目的基因导入植物细胞 4、目的基因的检测与鉴定 DNA mRNA 蛋白质 特性（抗虫或抗病） 活性比较 分子水平 个体水平 DNA分子杂交技术 分子杂交技术 抗原－抗体杂交 抗 虫或抗病的接种实验 与天然产品比较 DNA分子杂交技术 DNA分子杂交技术 原理： 工具： 碱基互补配对原则 基因探针 现象： 杂交带 现有一长度为1000碱基对(by）的DNA分子，用限制性核酸内切酶Eco R1酶切后得到的DNA分子仍是1000 by，用Kpn1单独酶切得到400 by和600 by两种长度的DNA分 子，用EcoRI,Kpnl同时酶切后得到200 by和600 by两种长度的DNA分子。该DNA分子的酶切图谱正确的是D 限制酶在DNA的任何部位都能将DNA切开吗？以下是四种不同限制酶切割形成的DNA片段： (1) …CTGCA (2) …AC (3) GC… …G …TG CG… （4） …G (5) G… (6) …GC …CTTAA ACGTC… …CG (7) GT… (8)AATTC… CA… G… 请用DNA连接酶将它们连接起来: ______和_____能连接成_________________________; ______和_____能连接成_________________________; ______和_____能连接成_________________________; ______和_____能连接成_________________________; ⒈要使目的基因与对应的载体重组，所需的两种酶是( )　 ①限制酶　②连接酶　③解旋酶　④还原酶　　　 Ａ．①②　Ｂ．③④　Ｃ．①④　Ｄ．②③ 2.基因工程的正确操作步骤是（　）①使目的基因与运载体结合　　②将目的基因导入受体细胞　③检测目的基因的表达是否符合特定性状要求④提取目的基因 Ａ． ③②④① 　　Ｂ． ②④①③　　　　　Ｃ． ④①②③ 　 　Ｄ． ③④①② 3.实施基因工程的第一步的一种方法是把所需的基因从供体细胞内分离出来，这要利用限制性内切酶。一种限制性内切酶能识别ＤＮＡ分子的ＧＡＡＴＴＣ顺序，切点在Ｇ和Ａ之间，这是利用了酶的（　）Ａ．高效性　　　Ｂ．专一性　　　Ｃ．多样性　　　Ｄ．催化活性易受外界影响 把目的基因与质粒DNA缝合时，中间的碱 基对靠 ＿＿＿连接起来，而两链上的磷酸、 脱氧核糖则在＿＿＿＿＿＿＿的作用下连 接起来。质粒是基因操作中经常用的 ＿＿＿＿。 氢键 DNA连接酶 运载体 根据下列所给材料回答问题： 材料一 把人的胰岛素基因拼接到大肠杆菌的质粒上，然后导入大肠杆菌内，产生出人的胰岛素。 材料二 把萤火虫的荧光基因转入烟草体内，培育能产生荧光的烟草。 材料三 有人把蜘蛛产生丝腺蛋白的基因转入羊的细胞中，在羊分泌的乳汁中加入某种物质后，可抽出细丝，这种细丝可望用作手术的缝合线。 （1）上述生物新品种的产生运用了 技术。 (2)一种生物的基因在另一种生物体内能够表达，而不影响其他基因的表达，这说明基因是有＿＿__效应的 片段，具有一定的＿＿＿