实验二微生物培养和基的配制和灭菌.pptVIP

实 验 二 微生物培养基的配制和灭菌 一、实 验 目 的 了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。 掌握加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。 二.实 验 原 理 1. 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。不同微生物对营养物质的要求各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。 培养基按成分可分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基；按物理状态可分为固体培养基、半固体培养基（0.2%～0.5%的琼脂）和液体培养基；按用途可分为基础培养基、营养培养基、鉴别培养基和选择培养基等。 培养基 是指由人工配制的、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物用的混合营养料。 培养基的种类 按照培养基的物理状态可分为 1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。 2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固体状态的培养基。 3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2—0.5%凝固剂而成的半固体状培养基。 （一）平板固体培养基制作 1. 按配方称取各组分(按100ml计算)到的三角瓶中. 2. 加入100mL水. 3. 在酒精灯上完全融化，取部分制作斜面培养基 3.其余部分塞上硅胶塞,用牛皮纸包扎好; 4.高压蒸汽灭菌 5.灭菌后,当培养基冷却至50℃左右时,倾注平皿(每100ml可制备5-6个平皿) 6.凝固后放冰箱备用 （二）斜面培养基制作 1. 在空试管内倒入2～3mL上述已经溶解好的培养基，【注意尽量不要让培养基沾到试管口】塞好硅胶塞. 2.放入烧杯中,高压蒸汽灭菌. 3.摆斜面,凝固后放冰箱备用. （三）液体培养基制作 1.按牛肉膏蛋白胨液体培养基配方称取相应成分到250ml的三角瓶中. 2. 加入100mL水. 3. 充分溶解.（取出50ml用于半固体培养基制作） 4. 在空试管内倒入2～3mL已经溶解好的培养基，【注意尽量不要让培养基沾到试管口】塞好硅胶塞. 5.放入烧杯中,高压蒸汽灭菌. 6. 冷却后放冰箱备用. 牛肉膏蛋白胨液体体培养基按下列配方及方法配制 牛肉膏: 0. 3g 蛋白胨: 1g NaCl: 0.5g 水: 100ml pH: 7.0-7.2 放入水浴锅内溶解后,分装到试管中,灭菌备用. （三）半固体培养基制作 1. 在25ml液体培养基中加入0.3%的琼脂粉 3. 完全溶解. 4. 在空试管内倒入2～3mL已经溶解好的培养基，【注意尽量不要让培养基沾到试管口】塞好硅胶塞. 5.放入烧杯中,高压蒸汽灭菌. 6.凝固后放冰箱备用. 牛肉膏蛋白胨半固体培养基按下列配方及方法配制 牛肉膏: 0. 3g 蛋白胨: 1g NaCl: 0.5g 琼脂: 0.3g 水: 100ml pH: 7.0-7.2 放入水浴锅内溶解后,分装到试管中,灭菌备用. 配制好后，写好培养基名称、班级、组别，再灭菌 每组留部分同学等灭菌结束之后，倒固体平板和摆斜面 任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。 常用的灭菌的方法有：干热灭菌、高压蒸汽灭菌、常压蒸汽灭菌、常压间歇式灭菌超高温灭菌、过滤除菌、辐射灭菌、化学药品灭菌等方法。 本实验培养基的灭菌常使用的是高压蒸汽灭菌，它是利用高温湿热空气使菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的。 思考题 培养基配制完成后，为什么必须立即灭菌?若不能及时灭菌应如何处理?已灭菌的培养基如何进行无菌检查? 操作过程 加水?装锅?盖盖?加热?当压力升为0.5kg/cm2时排放冷空气?正式升压?保压（1.1kg/cm2，121℃，保持20-30min）?停止加热?自然降压至零?排放余汽?开盖?取出灭菌物品?趁热摆斜面?检验灭菌效果。 本次实验报告内容 记录本实验配制培养基的名称、数量，并图解说明其配制过程，指明要点。 * * （一）培养基的配制 培养基简介 碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水 营养物质的浓度要适宜 营养物质之间的配比要适宜 培养基的pH值、渗透压、水活度和氧化还原电势等物理化学条件要