一株红海来源细三菌次级代谢产物抗肿瘤活性物质的分析.docxVIP

{I洲则渊一株红海细菌次级代谢产物抗肿瘤活性的研究 {I洲则渊 一株红海细菌次级代谢产物抗肿瘤活性的研究 摘 要 长期以来，恶性肿瘤对人类生命健康构成了严重威胁。药物治疗作为肿瘤治 疗的主要手段，一直受到人们的重视。但临床上常用的大多数药物只能使病情缓 解，无法达到完全治愈的目的，所以抗肿瘤新药的开发一直是药物研究领域的主 要方面。占地球生物资源80％的海洋生物，拥有丰富的代谢途径，可产生大量结 构新颖、功能独特的代谢产物，是抗肿瘤活性物质的重要来源。海洋微生物由于 种类繁多、易于规模化发酵、无资源再生问题等优点，是当前倍受重视的抗肿瘤 药物的新资源。红海作为世界上盐度和温度最高的海，其特殊的生态环境使其中 的海洋微生物品种更独特、代谢途径更特殊，是结构或活性新颖的天然活性物质 的良好来源。 本文对分离自红海海水的微生物进行抗肿瘤活性的研究，采用肝癌7721细胞 和宫颈癌Hela细胞为目标肿瘤细胞株，以抑制细胞数量增长为活性指标，从分离 到的红海微生物中筛选出一株活性较高的菌株212。并对菌株212的培养条件进行 了优化，经扩大培养后，以活性跟踪为导向对此菌株进行抗肿瘤活性成分的分离。 具体而言，本论文从红海海水样品中分离得到153株菌落形态有差异的微生 物，其中细菌141株，放线菌12株；针对肝癌7721细胞和宫颈癌Hela细胞，以 MTT细胞毒体外筛选模型，对分离到的微生物菌株进行抗肿瘤活性的筛选，共得 到13株具有抗肿瘤活性的菌株，占菌株总数的8．5％(其中细菌12株，占细菌总 数的8．5％；放线菌1株，占放线菌总数的813％)。经过重复测定，发现菌株212 的粗提物对肿瘤细胞具有较稳定、持久的抑制活性。当浓度为100 ug／ml时，其对 宫颈癌Hela细胞及肝癌7721细胞的抑制率分别为49．38％、47．92％。因此，选定 菌株212作为后续研究对象，通过对其形态观察、16S rDNA测序，鉴定其为 Micrococcus sp，。对菌株212的培养条件进行优化，发现其在pH7．8， NaCl 0．3mol·L-1，培养温度为28℃，培养4天时的生长情况最好。以此条件对菌株进行 U扩大培养20L，用乙酸乙脂对其发酵产物进行提取后，得到粗提物5．Og。分别采用 U 扩大培养20L，用乙酸乙脂对其发酵产物进行提取后，得到粗提物5．Og。分别采用 正己烷、三氯甲烷依次对粗提取进行分相萃取，测定活性，发现菌株212发酵液 中的抗肿瘤成分主要为中低极性的脂溶性物质，其正己烷相和三氯甲烷相提取部 分对肿瘤细胞的生长均具有显著的抑制作用，对宫颈癌Hela和肝癌7721细胞的抑 制率分别为40．74％，32．69％和65．82％，56．25％。而原乙酸乙酯萃取的水相和正己 烷、三氯甲烷分步萃取的水相提取物均未见明显抑制活性。采用硅胶柱层析和高 效液相色谱等分离手段对上述活性最高的三氯甲烷相提取部分进行活性成分的分 离，获得3个具有显著抗肿瘤活性的组分。采用GC．MS鉴定出菌株212代谢产物 粗提物中抗肿瘤活性部分主要含有二肽和环二肽类物质，推测二肽和环二肽类物 质可能是菌株212代谢产物粗提物中的活性物质。后续工作将对活性组分进行进 一步的分离和纯化。 关键词：红海微生物，分离，MTT，抗肿瘤活性，鉴定 Studies Studies on the antitumor activity of the secondary metabolites of bacteria isolated from Red Sea Abstract It iS well known that tumors have been a severe threat to human health for a long time．Medication is the main strategy for the treatment of tunlors．However,up to now most of the antitumor drugs can only alleviate the state of illness but Carl’t cure it completely．Therefore it is very important for US to develop new antitumor drugs． Marine organisms account for about 80％of the creatures on the Earth and they have abundant metabolic pathways．It is reported that marine organisms call produce large amounts o