抗人CD19单链抗体基因的构建表达及功能测定.pdf

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! # ’( )! *’ )# 年 月 !$$# % !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 +,-.,/0,1 !$$# !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 抗人!#$ 单链抗体基因的构建、表达及功能测定 !%’()*+(,% -. /01)2’’,% %3 4,562 !7-, 8-),-962 （ ） :)-5;2(’ 4+: =5-,’( *;- !#$ =(,52 陈 森，饶 青，王建祥，王 敏 ， ， MUR* +,B 27V W4BA X7*Y 84@BOZ4@BA @B6 X7*Y [4B 中国医学科学院 中国协和医科大学 血液学研究所血液病医院，天津 E$$$!$ ， ， ， 3$/#/)/% (- 4%5+/(,(12 +$6 .,((6 7#%+% 4(8 #/+, !#$%% 90+6%52 (- :%6#0+, ;0#%$0% +$6 %=#$1 $#($ :%6#0+, !(,,%1% ?#+$@ #$ E$$$!$ !#$+ 摘 要 采用 方法从分泌抗人类白细胞表面分化抗原 单克隆抗体的杂交瘤细胞中克隆出 和 可变区基 2;OIM2 M\% U ] 因，再通过重叠延伸拼接（ ） 方法在 和 可变区基因之间引入连接肽（ ），体外构建抗人 =-(43,O’5,1(@- ,S.,B=4’B IM2 U ] Y(:L+,1 E M\% 单链抗体（抗M\%O+3G5）基因。将其克隆至表达载体 IR;!F@ 并在大肠杆菌中表达。+\+OI7YR 和X,=.,1BO0(’. 分析结果 表明，抗 在 （ ）菌中获得表达，重组蛋白的相对分子量为 ，表达产物以不溶性包涵体形式存在，经过溶 M\%O+3G5 ^]! \RE !P?\ 解包涵体，镍柱亲和层析纯化和体外复性过程，获得了高纯度的单链抗体片段。流式细胞分析结果证实抗M\%O +3G5 可与人 类白细胞表面的分化抗原M\% 结合，保留了鼠源性单抗与M\% 结合活性。抗人 M\%O+3G5 的构建与表达，为下一步针对 ^ 淋巴系统恶性肿瘤的靶向治疗奠定了基础。 关键词 ，单链抗体（ ），原核表达 M\% +3G5 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） WPFN 7 $$$OE$N !$$# $#O$NFNO$N =9’()-+( ;, A,B,= ,B3’64BA C’1 ., (4A. @B6