在低氧预处理延迟心肌保护中钙网蛋白表达升高.pdf

536 生理学报 Acta Physiologica Sinica, December 25, 2006, 58 (6): 536-546 研究论文 在低氧预处理延迟心肌保护中钙网蛋白表达升高 徐菲菲，付艳，刘凤英，祝筱梅，刘秀华* 中国人民解放军总医院病理生理研究室，北京100853 摘 要：本文分别在整体实验和细胞培养条件下研究钙网蛋白(calreticulin, CRT)在低氧预处理(hypoxic preconditioning, HPC) 延迟心肌保护中的表达及其信号转导机制。 (1) 整体实验时Wistar 大鼠随机分为3 组：假手术(sham)组、仅结扎冠状动脉的 心肌缺血(myocardial infarction, MI)组和HPC 后再结扎冠状动脉的HPC+MI 组，分别于术后24 h 、14 d 和28 d 观察HPC 对 缺血后心功能和梗死区、危险区面积的影响；采用Western blot 检测CRT 表达以及p38 丝裂素活化蛋白激酶(p38 mitogen- activated protein kinase, p38 MAPK) 、应激活化蛋白激酶(stress-activated protein kinase, SAPK)活性。 (2) 原代培养Sprague- Dawley 乳鼠心肌细胞，随机分为6 组：低氧/ 复氧 (hypoxia/reoxygenation, H/R) 组、HPC 组、HPC+H/R 组、p38 MAPK 抑制剂SB203580+HPC+H/R (SB+HPC+H/R)组、SAPK 抑制剂SP600125+HPC+H/R (SP+HPC+H/R)组和正常对照组；采 用台盼蓝排斥实验、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)活性检测及流式细胞仪检测各组细胞损伤情况；采用Western blot 检测CRT 表达及p38 MAPK 、SAPK 的磷酸化水平。主要结果如下：(1)整体动物实验结果表明，HPC 改善缺血对心 肌左室压力最大上升/ 下降速度(±dp /dtmax) 的抑制，限制心肌梗死面积；HPC 后CRT 表达呈动态变化：术后24 h 时HPC+MI 组CRT 表达增高106% (P0.05 vs MI 组) ，以危险区最为显著；14 d 至28 d 表达逐步降低。相关分析显示，术后24 h 时 CRT 表达量与心功能呈正相关(r = 0.9867, P0.05) ，与梗死面积呈负相关(r = -0.9709, P0.05) 。 (2)细胞培养实验结果表明， HPC 可减轻H/R 诱导的心肌细胞LDH 漏出，增加心肌细胞存活率，降低细胞凋亡；单纯HPC 可诱导CRT 表达轻度增加 (222% ，P0.05 vs 对照组) ，而损伤性H/R 诱导CRT 过表达(503% ，P0.05 vs 对照组) ，HPC 可降低H/R 诱导CRT 表达 升高的幅度；p38 MAPK 活性与HPC 诱导的CRT 表达呈正相关(r = 0.9021, P0.05)，而SAPK 活性与其呈负相关(r = -0.8211, P0.05) 。由此得出结论：(1)整体实验中HPC 可明显改善缺血后心脏的收缩与舒张功能，限制心肌梗死范围，促进危险 区心肌恢复；心肌梗死早期，HPC 诱导CRT 表达上调，参与心肌保护；(2)细胞培养实验中HPC 可诱导CRT 适度表达， 增强原代培养乳鼠心肌细胞对H/R 损伤的抵抗力；p38 MAPK 可能介导HPC 诱导的CRT 表达，而SAPK 激活可能不利于 心肌保护。 关键词：钙网蛋白；低氧；缺血预处理；丝裂素活化蛋白激酶 中图分类号：Q463 ；R329.2 + 4 Calreticulin expression increases during delayed cardioprotection induced by hypoxic preconditioning XU Fei-Fei, FU Yan, LIU Feng-Ying, ZHU Xiao-Mei, LIU Xiu-Hua* Department of Pathophysiology, Chinese People’s Liberation Army General Hospital, Beijing 100853, China