实验三(to谁ng).pptVIP

Double suger iron slant 操作内容 6.注意事项 接种时均匀密涂。 贴片时，用无菌镊子轻轻触压药物纸片使之与培养基充分接触。 镊取药物纸片时一旦掉到培养基表面，则继续保持其位置，切勿镊起重新放置，以防不同抗生素交叉影响。 1.观察菌落特征（SS平板）。 2.将可疑菌落接种于双糖铁培养基上（穿刺+斜 面），37℃培养24h，观察结果。 2支/台 3.取可疑菌落做革兰染色。 1片/人 注意：按照上面的顺序依次进行实验。 三、药 敏 试 验 目的要求 1.掌握纸片扩散法药敏试验的原理及结果判定 2.了解药敏试验的操作方法和意义 原理 含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散，形成递减的浓度梯度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度。 主要材料 1.大肠杆菌菌液，白色葡萄球菌菌液 2.含抗生素的滤纸片： 青霉素 四环素 链霉素 庆大霉素 方法 标记分区 密涂接种 贴片 培养 结果观察 1.标记分区 底部观 四 2.密涂接种 分三次接种，每次取一环。第一次密涂接种后旋转60度二次密涂接种，然后同方向旋转60度后再次密涂接种。 顶部观 3.贴片 底部观 四 4.培养 置37℃温箱， 倒置培养18h-24h 青霉素 链霉素 庆大霉素 四环素 5.结果 抑菌圈 抑菌圈直径 下周内容 肠道杆菌生化反应鉴定、 肠道杆菌血清学鉴定、 肠道杆菌PCR鉴定。 * 注意！ 本次实验部分涉及生物危险(咽喉部及粪便中致病微生物)，请谨慎操作(无菌操作)！ 医学微生物学实验三（通） 3831082 　 内 容 提 要 一 观察细菌自然界分布和理化因素影响培养结果 （2学时 ） 革兰染色 二 肠道杆菌的鉴定（2学时）8支双糖铁、革兰染色 三 药敏试验（1学时）8个平板，菌液 一 观察细菌自然界分布和理化因素影响培养结果 （2学时 ） 菌落数量 菌落形态：包括菌落的大小、形状、边缘、光泽、质地、颜色和透 明程度等。 如何观察平皿中的细菌菌落？ 空气中的细菌检查： 自然沉降法(natural sinking method) 检查结果：CFU/皿 菌落形成单位 CFU (Colony-Forming Units)： 主要是对可见（即多数情况下形成菌落）的细菌数量进行测量的单位 1.空气中的细菌检查 落下菌数? ? 空气污染程度?? ? 评价30? ? ? ? 清洁? ? ? ? 安全30～50? ? ? ?中等清洁? ? ? ? 安全50～70? ? ? ?低等清洁? ? ? ?应该注意70～100? ? ? 高度污染? ? ? 对空气消毒 100? ? ? ? 严重污染? ? ? ?  比较前后菌落数量，得出结论 2.手指的细菌检查 3.紫外线灭菌效果观察 描述观察结果，分析原因。 4.咽喉部细菌的检查 α溶血，菌落周围形成朦胧不透明溶血环，多为条件致病菌。β溶血，菌落周围形成透明的溶血环，致病力强的细菌，引起多种疾病。γ溶血，菌落周围无溶血环，一般不致病 。 圆形、表面光滑、湿润、不透明的菌落 金黄色、 金葡在血平板上有溶血环（β溶血） S.aureas （透明溶血环） 金葡菌G+ 金黄色葡萄球菌G+ β-hemolytic streptococcus γ-streptococcus α-hemolytic streptococcus 灰白色、表面光滑,边缘整齐的菌落 血平板上有溶血现象 链球菌G+ 操作内容 从空气、咽喉及手指细菌平板中挑取菌落进行革兰染色，观察细菌形态，并记录结果（描述所取菌落形态和细菌形态）。 冲洗 染色完成之后，在涂片区滴上香柏油使用油镜观察实验结果 （3）革兰染色方法与步骤 1、细菌涂片的制备 涂片 干燥 固定 2、染色 初染（结晶紫） 媒染（卢戈氏碘液） 脱色 （95%乙醇） 复染（稀释石碳酸复红） 吸水纸 吸干 1min 1min 30s 30s 冲洗 冲洗 冲洗 二 肠道杆菌的鉴定(2学时) （一）肠道杆菌的生物学性状 埃希菌属：大肠埃希菌 沙门菌属：伤寒沙门菌 甲型、乙型副伤寒沙门菌 志贺菌属：痢疾志贺菌 肠杆菌科重要菌属及代表菌种 大肠杆菌: 生物学性状: G-