鱼类染色体的白细胞一PHA活体内.PDFVIP

遗传 HEREDfTAS(Beijinp) 8(5);42-441986 鱼类染色体的白细胞一PHA活体内 处理制片及其组型观察’‘ 高 建 民 （福建师范大学生物系，福州） 目前，鱼类染色体标本制备的方法主要是 具体操作步骤如下： 由Yamamot。等建立的肾细胞-PHA体外短期 1．前处理 将采来的活动物按 1-2毫 培养法和Ojim：等提出的外周血淋巴细胞离体 克八00克体重的剂量进行腹腔注射植物血凝素 培养法[1［,7,81，以及活体注射 PHA直接用肾组 (PHA) 上（海生物化学研究所生产），24小时 织的细胞制片等L3,41。用短期细胞培养研究鱼类 后重复注射 1次。再经 24小时后取材。取材 染色体有较突出的优点，它能保持染色体的自 前4-6小时按5微克／每克体重的剂量腹腔注 然状态，染色体的形态特征较易于显示出来，中 射秋水仙素溶液。 期分裂相多，染色体分散均匀、清晰。但细胞培 2．取材及低渗处理 动物体表经局部碘 养法需要有特定的条件，在设备差或野外工作 酒与70务酒精消毒之后，用0.2％肝素(130单 条件下不易做到，而且程序繁琐、费时较长 （一 位／每毫克）湿润的消毒过的注射器，自尾静脉 般需要3至10夭）L1]，在应用上受到一定的限 采血约0.2-1毫升。在采血量较大 （1毫升以 制。直接用常规空气干燥法制片，获得的中期分 上）时，可以先分离白细胞，即将肝素抗凝血 裂相少，制片效果亦不理想L41。我们参照 Baker 在4℃冰箱中静置1-2小时，或离心 3（00- 在蛇类的工作s【1并稍加改良，采用PHA活体内 500rpm3-10分钟），取上中层液。在全血或分 注射取外周血，不需进行细胞体外培养和无菌 离得的上中层液 含（白细胞）加人0.4外kc13-4 操作制备鱼类染色体标本。由于使用这种方法 毫升，低渗20-30分钟。 可避免杀死动物，因此也可以连续检查同一个 3．制片 按常规方法固定，空气干燥法 体的染色体组型。我们所获得的初步结果，为研 制片，Giernsa染色。 究某些需要保持其继续存活的对象，如稀有的 4．组型分析 染色体组型分析按丹佛会 杂交后代和通过细胞工程获得的少量实验对象 议 （1960）常规，染色体形态区分及命名，参照 的染色体提供了一个新途径。 同时，直接用从 Levan等 （1964）的标准。 活体繁殖的细胞制片，可以排除体外培养时可 能出现的有害效应，在环境监测中可望作为一 结 果 与 讨 论 种监测手段用于水质污染与鱼类染色体损伤相 从白细胞-PHA活体内处理制片所获得的 互关系的研究。 中期分裂相，随机统计了20个视野，得出细胞 材 料 和 方 法 GaoJaanmin:A DescriptionofinvivoTechnique forChromosomePreparationinFish(T:lapiaande- 实验动物为大黑罗非鱼 安（氏罗非鱼 Tila- rsonis)andItsKaryotype 砂aandersonii)2e,4?,采自福州市郊区水 1)本实验得到丁汉波教授和张健老师的热忱指导，特此 致谢。 产局水技站，体重100一400克。 本文于 1985年3月 13日收到。 42 有丝分裂指数为2.0110.96Jo 休组型公式似可定为 10sm+26st+8t,NF= 根据100个可靠的中期分裂相的染色体计 5斗