半滑舌鳎黑色素聚集激素重组制备与生物活性分析-水产学报.PDF

第 40 卷 第 10 期 水 产 学 报 Vol. 40, No. 10 2016 年 10 月 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA Oct., 2016 文章编号: 1000–0615(2016)10–1595–11 DOI: 10.11964/jfc.20151110173 半滑舌鳎黑色素聚集激素重组制备与生物活性分析 1, 2 1 1, 2 * 1 1 1, 2 朱学武 ， 徐永江 ， 柳学周 ， 史 宝 ， 王 滨 ， 李 斌 (1. 中国水产科学研究院黄海水产研究所，山东 青岛 266071 ； 2. 上海海洋大学水产与生命学院，上海 201306) 摘要：根据半滑舌鳎黑色素聚集激素(MCH1) 的cDNA序列设计特异性引物扩增成熟肽片 段，利用原核表达载体pET-32a 成功构建了重组MCH1/pET32a 质粒，转化大肠杆菌 BL21(DE3)后经IPTG诱导可产生N 端含6个组氨酸的重组蛋白。半滑舌鳎MCH1 重组蛋白 大小为29.9 ku ，32 °C条件下以0.2 mmol/L IPTG诱导6 h 时目的蛋白表达量最高，占菌体总 蛋白的49.8% 。Western blotting 免疫印迹表明，MCH1 重组蛋白可被6×His抗体特异性识 别。经Ni2+ -NTA亲和柱纯化，可获得高纯度的MCH1 重组蛋白。采用垂体离体孵育方法 测试蛋白活性，MCH1 重组蛋白可有效刺激或抑制垂体MCH和MSH肽的分泌，MCH肽水 平先上升后下降，在100 nmol/L达到峰值，MSH肽水平显著升高。随着外源MCH1 重组 蛋白浓度的增加，垂体MCH1 和MCH2 mRNA表达都呈现先上升后下降的趋势，POMC- a和PACAP mRNA表达都呈现明显下降趋势，而POMC-b 、MCHR1 、MCHR2 、MITF 基本 没有变化，表明获得的半滑舌鳎MCH1重组蛋白具有调节垂体激素分泌和基因表达的生理 功能。本研究可为研制半滑舌鳎无眼侧黑化调控的专用生物制剂提供理论与技术依据。 关键词: 半滑舌鳎；黑色素聚集激素；原核表达；生物活性 中图分类号: Q 785 ；S 917.4 文献标志码: A 在鱼类中，MCH最初是作为一个体色调控 制的调控过程。 的作用因子从大麻哈鱼(Oncorhynchus keta) 中分 半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)是一种暖温 [ 1] [6] 离鉴定出来的 。在鲆鲽类体色调控作用方面， 性近海大型底层鱼类，在我国沿海均有分布 ， MCH 的主要功能是抑制鲆鲽类等皮肤黑化进 是我国鲆鲽类养殖三大主导养殖种类之一，也