免疫相关疾病进展.ppt

过去-简单，粗糙 现在？ 未来-集成化，POCT 过去：人，环境，设备仪器，质量管理,操作，标本用量，试剂用量等。 现在 人员情况 人员情况 专业组与管理结构 LAMP环介导等温扩增法(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)技术应用及研究最新进展 LAMP 原理: 环介导等温扩增法，是一种新型的核酸扩增方法，其特点是针对靶基因的6个区域设计4种特异引物，在链置换DNA聚合酶(Bst DNA polymerasc)的作用下，60--65℃恒温扩增，15-60rain左右即可核酸扩增，效率可达109~10m个数量级，具有操作简单、特异性强、产物易检测等特点。在DNA合成时， 从脱氧核酸三磷酸基质(dNTPs) 中析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的镁离子反应，产生大量焦磷酸镁沉淀，呈现白色。因此，可以把浑浊度作为反应的指标，只用肉眼观察白色浑浊沉淀，就能鉴定扩增与否，而不需要繁琐的电泳和紫外观察。由于LAMP反应不需要PCR仪和昂贵的试剂，有着广泛的应用前景。LAMP法的应用领域:灵活运用能够简单、快速地进行基因扩增的特征,在各个领域得到广泛 。 LAMP法的原理及特征 LAMP法的特征 1、恒温条件（65℃）实现基因扩增 2、特异性非常高 3、扩增反应很迅速 4、扩增确认极简单 5、RNA样品也一步反应 6、不易受干扰物影响 相比传统的基因检测法检测更加简便、快速 一、免疫相关性疾病概念及发病现状 1.概念 免疫相关性疾病（Immune-related diseases）是指机体对自身或外来抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病。 2.常见疾病 常见的免疫相关性疾病有:类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis, RA）、系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus, SLE）、自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis ,AIH）、强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）、干燥综合症（Sjogren Syndrome，pSS）、、系统性血管炎（Systemic Vasculitis）、混合型结缔组织病等（Mixed connective tissue disease，MCTD）。 系统性红斑狼疮 临床表现： 病情发展至肝硬化后，可出现腹水、肝性脑病、食管静脉曲张出血。自身免疫性肝炎病人还常伴有肝外系统免疫性疾病，最常见为甲状腺炎、溃疡性结肠炎等。 实验室检查以γ球蛋白升高最为显著，以IgG为主，一般为正常值的2倍以上。肝功能检测血清胆红素、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶均可升高，血清白蛋白、胆固醇酯降低，反映了自身免疫性肝炎以肝细胞损害为主的特征。 二、免疫相关性疾病的诊断方法相关进展 免疫相关性疾病诊断的常用方法主要有： 乳胶凝集 (Latex Agglutination Test ) 比浊法 (turbidimetry ) 酶联免疫吸附法 (Enzyme-linked Immunosorbant Assay, ELISA) 胶体金 (Colloidal gold method ) 免疫荧光法 (Immunfluorescence Assay, IFA) 免疫印迹法 (Western-blot, WB) PCR (Polymerase Chain Reaction) 化学发光 (Radioimmunoassay,RIA) 芯片法 (gene-chip)等 乳胶凝集 (Latex Agglutination Test ) 比浊法 (turbidimetry ) 酶联免疫吸附法 (Enzyme-linked Immunosorbant Assay, ELISA) 胶体金 (Colloidal gold method ) 免疫荧光法 (Immunfluorescence Assay, IFA) 免疫印迹法 (Western-blot, WB) PCR (Polymerase Chain Reaction) 化学发光 (Radioimmunoassay,RIA) 芯片法 (gene-chip) 生物芯片技术: 生物芯片上的生物大分子与已标记的待测生物样品中靶分子特异性杂交，通过特定的仪器对杂交信号的强度检测分析，从而判断样品中靶分子的生物学信息 。 基因芯片原理 蛋白芯片技术检测自身抗体 抗核抗体检测方法-IIF 法 抗核抗体检测方法- WB法 抗核抗体检测方法- 芯片法 IIF检测ANA荧光染色模型 1．定义