病毒RNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书.doc

◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ 目录号 RP02 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 ◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ 目录号 RP02 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 ◆ TRIpure Reagent 抽提指南 ◆ 目录号 RP02 ◆ 使用手册 ◆ 实验室使用，仅用于体外 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成 保存 50次 裂解液RLB 室温 20 ml 去蛋白液RE 室温 25 ml 漂洗液RW 室温 10 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 RNase-free H2O 室温 10 ml RNase-free 吸附柱RA和收集管 室温 50套 室温储存12个月不影响使用效果， 各溶液使用后应及时盖紧盖子。 产品介绍： 采用特异性结合病毒RNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，病毒RNA提取试剂盒适合于从无细胞体液，包括血浆、血清、腹水、培养细胞上清液、脑脊髓液及尿液等中快速提取高纯的病毒RNA。该产品可以满足绝大多数的病毒RNA的提取要求， 如病毒RNA：HCV（丙肝病毒）,HIV（艾滋病毒）,和HTLV（人类嗜T淋巴细胞病毒）；等等。病毒裂解后，RNA后在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的病毒RNA从硅基质膜上洗脱。纯化后的病毒核酸无杂质和PCR抑制剂，可直接适用于PCR/RT-PCR等分析。 产品特点： 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 节省时间，简捷，单个样品操作一般可在20分钟内完成。 多次柱漂洗确保高纯度，提取的病毒RNA 纯度高，质量稳定可靠，可适用于各种常规操作，包括PCR/RT-PCR等。 操作步骤：（实验前请先阅读注意事项） 提示：第一次使用前请先在10ml漂洗液RW中加入40ml无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入! 200μl血清等体液（需回复到室温，不足可用0.9% NaCl或者PBS补足）转入上述1.5ml离心管，加入400μl 裂解液RLB, 立刻涡旋振荡充分混匀。 室温(15-25℃)放置10分钟，每隔5分钟，振荡混匀一次。 加入450μl无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀。 如果周围环境高于25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入。 将上述混合物加入一个吸附柱RA中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。 如果总体积超过750μl，可分两次将溶液加入同一个吸附柱RA中。 加500μl去蛋白液RE，12,000rpm离心30秒，弃废液。 加入500μl漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心30秒，弃废液，加入500μl漂洗液RW，重复一遍。 将吸附柱RA放回空收集管中，13,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。 取出吸附柱RA，放入一个RNase free的离心管中，在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase free H20（事先在 65－70℃水浴中加热效果更好）， 室温放置1分钟，12,000rpm 离心1分钟。如果想得到较多量的RNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，12,000rpm离心1分钟。 洗脱体积越大，洗脱效率越高。如果需要RNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于20μl，体积过小降低洗脱效率，减少RNA产量。 RNA病毒建议最好立刻使用，否则立刻短期放置在-70℃备用。