第三章 非细胞型生物.pptVIP

第一节 病毒 1892年俄国学者Ivanovsky首次发现烟草花叶病毒的感染因子能通过细菌过滤器。 1898年荷兰的Beijerinck将病原体命名叫virus； 1935年美国的Stanley首次提纯并结晶了TMV，随后英国的Bawden and Pirie证实该结晶只含核酸和蛋白质两种成分； 1952年Hershey and Chase证实噬菌体的遗传物质是DNA； 1971年Diener发现只含RNA一种成分的类病毒； 1981年Randles等又发现了拟病毒（卫星病毒）； 1982年Prusiner发现了只含蛋白质一种成分的朊病毒。 凡有细胞的生物生存之处，都有与其相对应的病毒存在。 　　萎缩腿的祭司 —脊髓灰质炎病毒引起 一、病毒的形态构造和化学成分 （一）病毒的大小 小，能通过细菌滤器，测量单位是nm； 多数病毒的直径在100nm上下； 病毒：细菌：真菌=1：10：100 球形 —二十面体对称（如腺病毒） 杆状 — 螺旋对称（如烟草花叶病毒） 蝌蚪状 — 复合对称（如大肠杆菌噬菌体） 球形 —　二十面体对称（腺病毒） 杆状 — 螺旋对称（烟草花叶病毒） 蝌蚪状 — 复合对称（大肠杆菌偶数噬菌体） 复合对称的代表——T偶数噬菌体 头部 颈部 颈环 颈须 尾部 尾鞘 尾管 基板 刺突 尾丝 （五）病毒的群体形态 1. 包涵体（显微镜下观察） 在某些感染病毒的宿主细胞内，出现光学显微镜可见的大小、形态和数量不等的小体； 多数位于细胞质内(具嗜酸性)，少数位于细胞核内(具嗜碱性)，也有细胞质和细胞核内都存在； 包涵体常用于病毒病的辅助诊断指标； 顾氏小体→天花病毒引起的包涵体 内基氏小体→ 狂犬病毒引起的包涵体 X体→烟草花叶病毒 2. 噬菌斑 将少量噬菌体与大量宿主细胞的混合液与培养基充分混匀，经培养，在平板表面布满宿主细胞的菌苔上出现用肉眼可见的透亮的小圆斑； 二、病毒的繁殖方式 （一）原核生物的病毒 — 噬菌体 1. 噬菌体的形态结构 噬菌体的基本形态：蝌蚪形、球形、丝状 2. 噬菌体的繁殖过程  吸附（adsorption） 目前已知病毒的核酸类型：5种 Baltimore(1971)把五类核酸分为六种途径合成m RNA 3.噬菌体效价的测定 效价（titre） 每mL试样中所含有的具侵染性的噬菌体粒子数，又称噬菌斑形成单位(pfu); 测定效价的方法 单层平板法 双层平板法 4.一步生长曲线 (one-step growth curve) —定量描述烈性噬菌体生长规律的实验曲线 用噬菌体的稀释液去感染高浓度的宿主细胞，保证每个细胞所吸附的噬菌体至多一个。经数分钟吸附后，在混合液中加入适量相应的抗血清，中和未吸附的噬菌体。然后用保温的培养液稀释此混合液，同时终止抗血清的作用，置于适宜的温度下培养。其间每隔数分钟取样，连续测定其效价并绘制成图。 5.溶源性 温和噬菌体(temperate phage) 凡吸附并侵入宿主细胞后，噬菌体的DNA只整合在宿主的染色体组上，并随宿主DNA的复制而进行同步复制，在一般情况下不引起宿主细胞裂解的噬菌体。此现象称溶源性或溶源现象。其宿主称溶源菌。 温和噬菌体的存在形式：游离态、整合态、营养态 温和噬菌体的类型 E.coli 的λ、Mu-1、P1、P2噬菌体 Salmonella typhimurium的P22噬菌体 将少量溶源菌与大量敏感指示菌混合，然后与琼脂培养基混匀后倒平板，能长出特殊菌落形态的为溶源菌。 作 业 制作有关植物病毒（TMV）、人类（AIDS、SARS）和脊椎动物病毒(禽流感病毒或腺病毒)、昆虫病毒的课件，由此了解不同种类病毒的特性和繁殖过程。 要求图文并茂。 一、类病毒 (Viroids) 1971年Diener首次报道,引起马铃薯纺锤形块茎病(PSTD)的病原体只含RNA一种成分； PSTV的结构模型： 动物感染病毒后的4种结果 第三节 病毒与实践 噬菌体与发酵工业； 昆虫病毒用于生物防治； 病毒在基因工程中的应用 — 载体 原核生物基因工程的载体 —λ 噬菌体 动物基因工程的载体 — SV40、人的腺病毒 植物基因工程的载体 — CaMV 真核生物基因工程的载体 — 杆状病毒 噬菌体的繁殖过程 同一样品根据噬菌斑计算的效价和用电镜计算的效价之比； 噬菌体的EOP一般大于50%； 植物或动物病毒的EOP一般为10% 成斑率（efficiency of plating，EOP） 测定方法 一步 生长曲线 三个重要特征参数：潜伏期、裂解期、裂解量 裂解量 = 平稳期的效价 / 潜伏期的效价 λphage λ 噬菌体研究得最清楚（P73） λ 噬菌体作为原核生物基因工程的载体的优点