实时荧光定量PCR快速诊断肺炎链球菌-检验医学.PDFVIP

检验医学２０１３年３月第２８卷第３期　ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｍａｒｃｈ２０１３，Ｖｏｌ２８．Ｎｏ３． ·２２１· 文章编号：１６７３８６４０（２０１３）０３０２２１０４　　　中图分类号：Ｒ４４６．５　　　文献标志码：Ａ　　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３８６４０．２０１３．０３．０１４ 实时荧光定量ＰＣＲ快速诊断肺炎链球菌 颜善活，　孙　雷，　符可鹏，　卓永光，　杨善业，　樊祖茜，　黄永霞 （广西壮族自治区钦州市妇幼保健院，广西 钦州５３５０００） 　　摘要：目的　建立实时荧光定量聚合酶链反应（ＰＣＲ），用于肺炎链球菌检测和流行病学调查。方法　以肺 炎链球菌自溶素（ｌｙｔ）和溶血素（ｐｌｙ）的基因为目的序列分别设计引物和探针，将其分别与１０株肺炎链球菌、１３ 株非肺炎链球菌ＤＮＡ以及不同浓度梯度的肺炎链球菌ＤＮＡ进行荧光定量ＰＣＲ，并将引物和探针应用于２００例 临床标本检测，同时通过传统的微生物培养鉴定的方法来验证荧光定量ＰＣＲ的特异性和敏感性。结果　１０株 肺炎链球菌均获得了明显的扩增产物，１３株非肺炎链球菌ＤＮＡ无明显的扩增信号，其检测敏感性可达 １００ｆｇ； ２００例临床标本，实时荧光定量ＰＣＲ检测出４２例肺炎链球菌阳性（阳性率为２１％），而培养法阳性 １６例（阳性 率为８％）。结论　实时荧光定量ＰＣＲ是一种敏感、特异、快速的检测肺炎链球菌方法，可用于肺炎链球菌的诊 断和流行病学调查。 关键词：肺炎链球菌；实时荧光定量聚合酶链反应；Ｔａｑｍａｎ探针 　　ＲａｐｉｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅｂｙｒｅａｌｔｉｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎＰＣＲ　ＹＡＮＳｈａｎｈｕｏ， ＳＵＮＬｅｉ，ＦＵＫｅｐｅｎｇ，ＺＨＵＯＹｏｎｇｇｕａｎｇ，ＹＡＮＧＳｈａｎｙｅ，ＦＡＮＺｕｑｉａｎ，ＨＵＡＮＧＹｏｎｇｘｉａ．　（ＧｕａｎｇｘｉＺｈｕａｎｇＡｕｔｏｎｏｍｏｕｓ ＲｅｇｉｏｎＱｉｎｚｈｏｕＣｉｔｙＷｏｍｅｎａｎｄＣｈｉｌｄｒｅｎＣａｒｅＨｏｓｐｉｔａｌ，ＧｕａｎｇｘｉＱｉｎｚｈｏｕ５３５０００，Ｃｈｉｎａ） 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｒｅａｌｔｉｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ（ＰＣＲ）ｆｏｒｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎａｎｄｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃａｌｓｔｕｄｉｅｓｏｆＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅａｕｔｏｌｙｓｉｎ（ｌｙｔ）ｇｅｎｅａｎｄｈｅｍｏｌｙｓｉｎ （ｐｌｙ）ｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄｔｏｄｅｖｅｌｏｐｐｒｉｍｅｒｓａｎｄｐｒｏｂｅ．Ａｔｏｔａｌｏｆ１０ｓｔｒａｉｎｓｏｆＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ，１３ ｓｔｒａｉｎｓｏｆｎｏｎＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅＤＮＡａｎｄｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｔｒａｉｎｓｏｆＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅＤＮＡ ｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｒｅａｌｔｉｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎＰＣＲ，ａｎｄ２００ｃｌｉｎｉｃａｌｓｐｅｃｉｍｅｎｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｐｒｉｍｅｒｓａｎｄ ｐｒｏｂｅ．Ｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙａｎｄｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｗｅｒｅａｌｓｏａｎａｌｙｚｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ１０ｓｔｒａｉｎｓｏｆＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄｔｏｏｂｔａｉｎａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｐｒｏｄｕｃｔｓ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，１３ｓｔｒａｉｎｓｏｆｎｏｎＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅＤＮＡｈａｄｎｏｏｂｖｉｏｕｓ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ａｎｄｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｗａｓ１００ｆｇ．Ａｍｏｎｇｔｈｅ２００ｃｌｉｎｉｃａｌｓｐｅｃｉｍｅｎｓ，ｒｅａｌｔｉｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎＰＣＲ ｄｅｔｅｃｔｅｄ４２ｃａｓｅｓｏｆＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅｐｏｓｉｔｉｖｅ（ｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｗａｓ２１％），ｗｈｉｌｅｔｈｅｃ