环境毒理学（董国日）051环境毒理学常用实验方法.pptVIP

暴露水平是估算人体接触剂量的依据，因此要求测量结果精确、可靠、有代表性。暴露测量可分为两类：环境测量和生物测量。 1．环境测量 通常采用对暴露的环境因素进行抽样测量的方法，估计个人暴露量。要考虑到所有可能摄入选径，估计总暴露量。 2．生物监测 暴露水乎的测量由于变异因素太多而很难达到精确的要求。测量人体组织、体液中的有害物质或微量元素的浓度以代表人体的暴露水平，称为“生物剂量”，也称“体内负荷”，这比环境测量的精确性高，虽然体内负荷也存在着变异。 体内负荷的测量对于化学性质稳定，有蓄积倾向的物质尤为适宜。对于在体内被转化和易代谢的物质，则可测定其代谢产物在体内的水平、以估计该物质的体内负荷。 (二)健康效应测量 探讨发现早期健康损害的敏感和特异的指标。 对敏感人群和高危人群的健康调查是早期发现环境不利因素危害的重要途径。 敏感人群：易受侵害的人群。例如，婴幼儿对铅和甲基汞等神经毒物特别敏感，婴幼儿就是铅污染或甲基汞污染的敏感人群。 高危人群，就是暴露于某种可能引起持殊健康损害的污染物人群。例如铅冶炼厂的工人患铅中毒的危险性比一般居民大。国内把这两种情况统称为高危险人群。高危险人群是环境流行病学研究的重点人群。 三、环境流行病学研究方法 一般流行病学研究方法有描述性的(包括分布的描述和现况研究)、分析性的(包括病例—对照和群组研究)、实验性的和理论的研究。 由于环境流行病学研究的内容有其本身的特点，在采用这些基本方法时应有所选择。 (1)如暴露因素已知，欲研究其健康效应，可以采用现况研究设计和群组研究设计，或实验研究设计。在选择观察指标时，应当注意人群总体的健康效应谱，即除了研究疾病状态，还应研究没有表现出临床症状的暴露人群。 (2)在出现健康异常状态后，为追究其病因，可以来用病例—对照研究或现况研究得病因线索后，再选用群组研究或实验研究证实。 从上表，可以任一死亡率换算为相应的概率单位。 A：剂量对数~死亡百分率 B：剂量对数~概率单位 LC50计算步骤如下： a.根据死亡率查概率单位(死亡率为100％或0％不计) b.绘图求回归方程。 c.求y=5的浓度对数（m），其反对数即为LC50 y=2.78x-2.76 同理可得LC5、 LC10、…… d.求LC50的可信限 先求LC50的标准误差(Sm)： S(校准差)=1/k 本例中：S=1/2.78 平均致死量法（又名寇氏法） 试验要求： ①每个试验组动物数相同； ②各组剂量按等比级数分组； ③最大剂量的死亡率最好为100％或与之接近，最小剂量的死亡率最好为0％或与之接近。 式中： Xm——最大剂量的对数值； i—相邻剂量比值的对数； ——各组死亡率的总和（以小数表示）。 例小鼠腹腔注射致百虫急性毒性试验结果如下表所示，求 LD50 式中： p——一个组死亡率； q——一个组存活率； i——相邻剂量比值的对数； n——各组动物数。 第二节 亚慢性和慢性毒性试验 一、蓄积试验及其方法： （一）蓄积作用：某些物质以较小剂量反复作用于机体，可使机体对该物质的反应性增强，即一次染毒不引起明显中毒反应或死亡的剂量，经分次重复染毒后，可引起明显中毒或死亡，此种现象称为蓄积作用(accumulation)。 可分两种： 物质蓄积：毒物在体内的排出量小于进入量，以致毒物在体内的贮留量增多为物质蓄积； 功能蓄积：毒物进入机体后，并未发现在体内明显贮留，但可引起机体功能改变的逐渐累积，导致对该毒物的反应性增强。 耐受性(tolerance)：机体多次接触化学物质后．对该物质产生反应性减弱的现象，显示不易发生慢性中毒。 （二）蓄积作用的测定方法 有多种，常用蓄积系数法。 蓄积系数(accumulation coefficient)K： ED50(n) ——多次染毒使半数动物出现某种效应的总剂量; ED50(1) ——一次染毒引起同一效应半数效量。 若以死亡为毒效应指标，上式为 K越小，受试化合物的蓄积毒性越大。 K 蓄积作用强度 ＜1 高度蓄积 1~3 明显蓄积 3~5 中度蓄积 ＞5 轻度蓄积 1．固定剂量法 ：固定每天染毒剂量为1/20—1/5 LD50，连续染毒，直至实验动物半数死亡。如果染毒剂量累计已达5个LD50 动物死亡仍末达半数，实验均可告结束，计算蓄积系数，作出评价。 2．递增剂量法 ：先测定LD50（1），然后对另一组动物每天染毒，以4天为一期，开始给予0.1LD50。以后每期按1.5倍递增剂量，直至动物半数死亡，或实验已达28天，可结束实验，计算系数。