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浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 致谢 致谢 时间过得很快，不知不觉，已是博士生涯的第四个春天，临近学业的尾声， 回忆过往点滴，好似一个人生小剧场在放着一幕幕熟悉的画面，欢笑与泪水交织， 有苦恼，有彷徨 每每此时，始终有位长者在指引着我，那就是我的导师一谢幸 教授，一个求是求真的学者，一个杏林春暖的医者，一个宽厚如父的长者，能成 为导师的学生是我毕生的荣幸。 课题及毕业论文得以顺利完成离不开导师的悉心指导和谆谆教诲。从研究的 选题设计、实施操作、归纳总结到论文的撰写，无不凝聚着导师的智慧和心血。 导师严谨务实的治学态度，进取求真的科研精神、渊博深厚的学术知识，无私忘 我的工作风格都由衷地让我钦佩。他对科研的执着，对工作的热爱，对真理的追 求都深深影响着我，谨此向导师致以崇高的敬意和感谢! 衷心感谢吕卫国教授，吕老师治学严谨、宽厚待人，对学生体恤入微。在学 习和生活上给予我极大的关心和鼓励! 衷心感谢程晓东老师、王新宇老师、万小云老师、陈亚侠老师、陈晓静老师、 程琪老师、马俊彦老师、费向炜老师和免疫组化室周彩云老师在我课题完成中给 予的巨大帮助和无私指导! 衷心感谢课题组所有的师兄师姐师弟师妹们，感谢邹健、王芬芬、许君芬、 左鹏、张松法、田其芳、马月江、黄璐、黄永洁、章鉴洋、彭巧华、冯燕、杨诗 舟、陈婷婷、张徐、徐姗姗、俞燕、夏莉莉 感谢肿瘤组全体成员，谢谢他们 对我生活和工作上的帮助和支持，使我得以顺利完成学业! 衷心感谢父母的养育，供养读书二十余年，三十而立，成家而未立业，有愧! 养育之恩，无以回报! 衷心感谢公婆和爱人的默默支持和鼓励!让我安心求学而无后顾之忧! 感谢生命中遇到的每一个人，没有触动就没有沉淀，没有经历就没有成长! 博士生涯的结束，是人生另一个起点的开始。前方有荆棘有鲜花，又将是人 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 致谢 生的一个新征程! 最后祝愿所有的老师、家人和朋友们都幸福安康，心想事成! II 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 中文摘要 JunD在宫颈癌进展中的功能及其分子机制研究 浙江大学医学院 妇产科学 博士研究生 曹竹 导 师 谢幸教授 中文摘要 宫颈癌是全球女性第四大常见恶性肿瘤，也是全球女性排名第四的死亡原因。 虽然随着筛查的大规模开展，手术及放化疗的长足进展，宫颈癌的发生率和死亡 率有一定下降，但中晚期宫颈癌患者的预后仍然不尽如人意，寻找中晚期宫颈癌 有效的治疗方法对改善该类患者的预后意义重大。高危人乳头瘤病毒(High Risk Humanpapillomavirus，HR．HPV)持续感染是官颈癌发生与进展的必要因素。病毒 癌基因通过影响宿主细胞的相关分子来扩大自身癌基因的恶性效应，探索宿主细 胞中受病毒影响的相关分子，是临床研究中寻找潜在治疗靶标的重点。 JunD蛋白是由几附D基因编码，最晚加入Jun家族的成员，其表达方式及生物 学功能与家族其它成员并不相同。JunD激活或抑制各种不同的靶基因介导细胞增 殖、凋亡和分化等功能。在肿瘤细胞中，JunD蛋白的表达紊乱、对JunDNN控异 常及与其它因子如MENl、cyclinDl、p21、MMP。7等的相互作用，参与肿瘤的形 成、转移、血管生成等过程。 为了明确JunD在宫颈癌进展中的功能及分子机制，本研究首先利用细胞功能 实验探索JunD在宫颈癌中对细胞生物学行为的影响，再通过生物信息学方法寻找 靶基因，通过基因功能实验验证及确定其发挥作用的靶基因，明确靶基因在官颈 癌中的功能，最后利用官颈相关组织样本验证JunD及靶基因的组织相关性，并比 较分析JunD与靶基因的表达水平与宫颈不良预后病理参数的相关性。旨在寻找官 颈癌潜在的治疗靶点，为探索中晚期宫颈癌的治疗新策略提供证据。 III 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 中文摘要 第一部分JunD对宫颈癌细胞生物学行为的影响 目的： 明确JunD对宫颈癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移等生物学行为的调控作用。 方法： 采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time RT—PCR，qRT．PeR)法和western blot检a!】JunD在HPV[j日性的宫颈癌细胞系和HPv阴性的细胞系的mRNA和蛋白水 平。利用细胞转染技术分别在宫颈癌细胞株SiHa和CaSki中转染JunDd,干扰序列或 阴性对照下调JunD的表达，在HPVI碉性细胞株U20Se转染JunD表达质粒或空载质 粒上调JunD的表达，分别通过CCK．8法检测肿瘤细胞的增殖能力、流式细胞技术 检测细胞凋亡、Transwell联合或不联合matrigel实验检测细胞的侵袭和迁移能力。 结果： 1．JunD在HPVN性宫颈癌细胞株中的表