高效毛细管电泳扩散进样.pdfVIP

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高效毛细管电泳的扩散进样 陈 义 竺 安 (中国科学院化学研究所,北京,100080) [提要] 本文提出了用扩散作为高效毛细管电泳的进样方法,解释了此法的原理。用扁管区带电泳法 研究了扩散进样对电泳效率的影响、歧视问题及其抗样品基质干扰的能力,并与常用的电迁移法和虹吸 法进行了比较,指出了扩散进样的缺点。 高效毛细管电泳 H(PCE)的效率与很多因素有 关[,其中进样方法是最重要的因素之一,它决定初 始区带的宽度和分布形式,进而影响效率及定性定 量结果。目前已用的方法有:微量注射器、进样阀、电 分流、电迁移(EM)和虹吸(Siph)等法[2]。前三法有死 体积和泄漏问题。注射器与进样阀只可用于内径 100蘭μm以上的毛细管,且电泳效率低。EM法与Sph 法将样品直接引入毛细管,操作容易,是最常用的方 法。但EM法,尤其是Siph法,抗样品基质干扰能力 为确定Z→∞蓿,我们略去C/CD<?5?10-5牟糠郑 差,EM法还存在严重的样品歧视 见(后文)。我们提 出的扩散 D(iff)进样法,在一定程度上克服了这些问 正态分布表查得[: 题。本文报告Diff法的原理及用扁管区带电泳 (FCZE)[3]测到的结果。 用梯形近似求和法,即: 方法原理 当将装好载体的毛细管插进样品杯时,因管口 其中Φ略写了变量,n为求和步数,令n=40,有: 处存在浓度梯度,样品便扩散进入管中。可用Fick扩 散定律描述这种过程: 对(3)求导可得初始区带的几率函数,进而求得 标准方差为: C和D分别为样品的浓度和扩散系数;ti为进样时 间;Z轴指向管的深处,原点在管口平面中心上。因 于是有绝对进样量公式 HPCE所需的进样量很小,不影响样杯中的浓度C, 故有: S为毛细管截面积,C 的单位取mol/L,其余用M. S.kg单位。 EM和Siph法的初始区带一般作均匀分布处理 亦即2[,7]: 此即自由扩散条件。若不计D与C的关系,方程(1) 的解为[: 其中上、下标ES表示EM和Siph;ΔL为初始区带 宽度;Vim为进样速度,对于EM和Siph法分别为[2]: 为正态分布函数。由此可知扩散初始 μ为样品淌度,蘯μ为电渗率,Ei为进样电场强度; 区带具有图1所示的分布形式。其平均浓度为: Δh为液柱高度,K与毛细管的长度、截面积及管中 载体的粘度、密度有关,在选定系统下是一常数。 数衰减形式影响效率,但它们的贡献不是并行的,当 实 验 部 分 σψ<(σ?ψ)max2×10-7m时,椎ψ的贡献可略,反之,ψ 一()实验装置 实验装置如图2所示。其 的作用占主导地位[6]。由(5)、(7)、(9),在QD=QES 中扁管是 自制的FEP聚(乙烯丙烯氟化物)管[6],规格 时,我们有: 为0.2×0.65×600/800mm。直流高压电源为美国 Spellman公司的RER40PN型。检测器为瑞典LKB 公司的2238UVCORDSⅡ型。大孔圆管7用于Siph 显然,Diff的σ。可能大于EM或Siph法,但 ψD总小 进样及开管电泳。 于后两法:

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