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高效毛细管电泳的扩散进样
陈 义 竺 安
(中国科学院化学研究所,北京,100080)
[提要] 本文提出了用扩散作为高效毛细管电泳的进样方法,解释了此法的原理。用扁管区带电泳法
研究了扩散进样对电泳效率的影响、歧视问题及其抗样品基质干扰的能力,并与常用的电迁移法和虹吸
法进行了比较,指出了扩散进样的缺点。
高效毛细管电泳 H(PCE)的效率与很多因素有
关[,其中进样方法是最重要的因素之一,它决定初
始区带的宽度和分布形式,进而影响效率及定性定
量结果。目前已用的方法有:微量注射器、进样阀、电
分流、电迁移(EM)和虹吸(Siph)等法[2]。前三法有死
体积和泄漏问题。注射器与进样阀只可用于内径
100蘭μm以上的毛细管,且电泳效率低。EM法与Sph
法将样品直接引入毛细管,操作容易,是最常用的方
法。但EM法,尤其是Siph法,抗样品基质干扰能力
为确定Z→∞蓿,我们略去C/CD<?5?10-5牟糠郑
差,EM法还存在严重的样品歧视 见(后文)。我们提
出的扩散 D(iff)进样法,在一定程度上克服了这些问 正态分布表查得[:
题。本文报告Diff法的原理及用扁管区带电泳
(FCZE)[3]测到的结果。 用梯形近似求和法,即:
方法原理
当将装好载体的毛细管插进样品杯时,因管口 其中Φ略写了变量,n为求和步数,令n=40,有:
处存在浓度梯度,样品便扩散进入管中。可用Fick扩
散定律描述这种过程: 对(3)求导可得初始区带的几率函数,进而求得
标准方差为:
C和D分别为样品的浓度和扩散系数;ti为进样时
间;Z轴指向管的深处,原点在管口平面中心上。因 于是有绝对进样量公式
HPCE所需的进样量很小,不影响样杯中的浓度C,
故有:
S为毛细管截面积,C 的单位取mol/L,其余用M.
S.kg单位。
EM和Siph法的初始区带一般作均匀分布处理
亦即2[,7]:
此即自由扩散条件。若不计D与C的关系,方程(1)
的解为[:
其中上、下标ES表示EM和Siph;ΔL为初始区带
宽度;Vim为进样速度,对于EM和Siph法分别为[2]:
为正态分布函数。由此可知扩散初始
μ为样品淌度,蘯μ为电渗率,Ei为进样电场强度;
区带具有图1所示的分布形式。其平均浓度为:
Δh为液柱高度,K与毛细管的长度、截面积及管中
载体的粘度、密度有关,在选定系统下是一常数。 数衰减形式影响效率,但它们的贡献不是并行的,当
实 验 部 分 σψ<(σ?ψ)max2×10-7m时,椎ψ的贡献可略,反之,ψ
一()实验装置 实验装置如图2所示。其 的作用占主导地位[6]。由(5)、(7)、(9),在QD=QES
中扁管是 自制的FEP聚(乙烯丙烯氟化物)管[6],规格 时,我们有:
为0.2×0.65×600/800mm。直流高压电源为美国
Spellman公司的RER40PN型。检测器为瑞典LKB
公司的2238UVCORDSⅡ型。大孔圆管7用于Siph 显然,Diff的σ。可能大于EM或Siph法,但 ψD总小
进样及开管电泳。 于后两法:
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