植物气味分子与发苜蓿盲蝽化学感受蛋白识别结合特性分析.docx

lI l I ————．●●●■●__■■■■-．．一 1．2．2昆虫化学感受蛋白的分子结构 1．2．2昆虫化学感受蛋白的分子结构 4 1．2．3化学感受蛋白的表达分布情况 ．5 1．2．4化学感受蛋白的功能 ．．6 1．3 Y型嗅觉仪的应用现状 ．7 1．3．1 Y型嗅觉仪的工作原理 ．7 1．3．2 Y型嗅觉仪的应用 8 1．4研究的目的和意义 8 2．材料与方法 ．10 2．1试验材料 。10 2．1．1供试昆虫 ．．10 2．1．2供试样品与试剂 。10 2．1．3主要的试验设备 ．．10 2．2试验方法 ．10 2．2．1 RNA的提取 ．10 2．2．2第一链cDNA的合成 ll 2．2．3苜蓿盲蝽Al inCSPs基因的引物设计 11 2．2．4苜蓿盲蝽A1 inCSPs基因的PCR扩增 11 2．2．5苜蓿盲蝽化学感受蛋白基因的克隆，表达及纯化 。12 2．2．6包涵体处理 ．12 2．2．7苜蓿盲蝽CSPs基因组织表达谱 12 2．2．8扩增效率一致性验证及数据处理 ．．13 2．2．9 A1 inCSPs的三维结构模拟 13 2．2．10荧光竞争结合实验 14 2．2．11定点突变和突变体的表达 14 2．2．12 Y型管嗅觉仪 ．15 3．结果与分析 ．16 东北农业大学理学硕士学位论文3．1苜蓿盲蝽化学感受蛋白的克隆、表达、纯化及表达谱分析 东北农业大学理学硕士学位论文 3．1苜蓿盲蝽化学感受蛋白的克隆、表达、纯化及表达谱分析 ．16 3．1．I A1 inCSP6的克隆、表达及纯化 16 3．1．2 A1 inCSP4的克隆、表达及纯化 17 3．1．3 A1inCSP5的克隆、表达及纯化 19 3．1．4扩增效率一致性验证 ．20 3．1．5苜蓿盲蝽化学感受蛋白彳』勘岱纷组织表达谱分析 20 3．2苜蓿盲蝽化学感受蛋白A1 inCSPs的3D结构模拟及结合位点预测 ．25 3．2．1 A1 inCSP4的三维结构模拟 25 3．2．2 A1 inCSP5三维结构模拟 28 3．2．3 A1 inCSP6三维结构模拟 28 3．3植物挥发性气味分子与苜蓿盲蝽化学感受蛋白Al inCSPs的结合特性 3 1 3．3．1 A1 inCSP4的荧光结合实验 3 l 3．3．2 A1 inCSP5的荧光结合实验 ．36 3．3．3 AI inCSP6的荧光结合实验 39 3．4定点突变检测苜蓿盲蝽化学感受蛋白Al lnCSP5可能结合位点 43 3．4．1 A1 inCSP5的结合特性 43 3．4．2 AI inCSP5的定点突变及突变体的结合特征 44 3．5苜蓿盲蝽对60种植物气味化合物的趋向行为研究 47 4．讨论 ． ．．51 4．1苜蓿盲蝽化学感受蛋白基因表达谱分析 ．5l 4．2苜蓿盲蝽化学感受蛋白AlinCSP4的气味结合特性及其行为反应验证 51 4．3苜蓿盲蝽化学感受蛋白AlinCSP5的结合特性及预测结合位点功能 53 4．4苜蓿盲蝽化学感受蛋白AlinCSP6的结合特性 54 5．结论 56 5．I苜蓿盲蝽化学感受蛋白基因表达谱分析 ．56 5．2苜蓿盲蝽化学感受蛋白AlinCSP4的气味结合特性及其行为反应验证 56 ．，5．3苜蓿盲蝽化学感受蛋白AlinCSP5的结合特性及预测结合位点功能 ．。。 56 5．4苜蓿盲蝽化学感受蛋白AlinCSP6的气味结合特性 56 致谢 ．58 参考文献 ．．59 攻读硕士学位期间发表的学术论文 68 CONTENTSCOINTENTS CONTENTS COINTENTS Abstract in Chinese 。I Abstract III 1．Introduction ．1 1．1 The progress of study on the relationship between plant volatiles and the behavior of insectl 1．1．1 Kinds of plant volatiles l 1．1．2 Production of plant volatiles ．2 1．1．3 Impact of plant volatiles 011 the host selection behavior ．． ．．2 1．1．4 Impact ofplant volatiles on spawning behavior ．2 1．1．5 Impactofplantvolatiles onfeedingbeh