食品生物技过术实验指导书2012.docVIP

食品生物技术实验指导 何志平 等编 农业与食品科学学院 20012.10 实验一 质粒DNA的提取及电泳检测 一 实验目的 通过本实验学习掌握碱裂解法提取细菌质粒DNA。 二 实验原理 1. 细菌中有两种DNA，即染色体DNA和质粒DNA。 2. 质粒DNA的提取方法有三种：碱裂解法，煮沸法，去污剂（如Triton和SDS）裂解法。3. 碱裂解法比较剧烈，可破坏碱基配对，使宿主细胞DNA变性，共价闭合环状DNA由 于空间缠绕，两条链不会彻底分开。当外界条件到达复性条件时，质粒DNA的双链又迅速恢复原状，而较大的线性染色体DNA难以复性。 三 实验材料：转化后的细菌(含有质粒的大肠杆菌) 四、实验用具和药品 1. 实验用具: 摇床，离心机，移液器及枪头，玻璃试管（15mL）及塞子，离心管（1.5mL） 2. 实验试剂： 1 溶液I 50 mmol/L 葡萄糖 25 mmol/L 三羟甲基氨基甲烷（Tris）Tris·HCl（pH8.0） 10 mmol/L 乙二胺四乙酸（EDTA）（pH8.0） 2 溶液II 0.4mol/L NaOH，2%SDS，用前等体积混合 3 溶液III 5 mol/L 乙酸钾 60ml 冰乙酸 11.5m