三疣梭子蟹养殖塘水体可培养微生物多样性的研究环境科学专业论文.docxVIP

摘 摘 要 可培养微生物在养殖池塘的物质循环、能量流动、生态平衡及环境净化 等方面起着十分重要的作用，与蟹病的发生与防治密切相关。本文将传统分 离培养方法与聚合酶链反应(PCR)、变性梯度凝胶电泳(DGGE)和核酸序 列测定等现代分子生物学技术相结合，对三疣梭子蟹进水塘和养殖塘环境中 的可培养微生物多样性进行了研究。本实验研究内容主要包括三部分：第一 部分基于形态结构特征上的可培养微生物分群研究。10月份在三疣梭子蟹养 殖池塘水体中分离240株细菌，根据菌落特征分成15个类群，其中有3个 优势类群，5个较丰富类群和7个稀有类群。再依据菌体特征分为31个亚群， 其中球杆状亚群是最优势亚群；结果表明进水塘和养殖塘的优势类群和亚群 组成存在差别，当进水塘水体进入养殖塘后，其优势菌菌群和亚群都发生了 显著改变；第二部分为可培养微生物遗传多样性的研究。建立实验分离到得 可培养微生物的DGGE指纹数据库，同时测定了相应的16S rDNA序列并分 析了它们的系统发育学地位。结果表明实验分离到得可培养微生物分为73 个系统发育型，分布于细菌域中的3个门7个纲16个科中的大约20个属。涵 盖菌株数最多的4个属为：Bacillus属、Vibrio属、Halobacillus属、 Stenotrophomonas属。。通过对比发现进水塘和养殖塘的优势菌种发生变化，并 且进水塘的菌种多样性多于养殖塘。第三部分为养殖水体功能微生物菌群的 研究。对上述菌株进行了转化氮、磷、硫元素化合物生态功能试验和酪蛋白 酶，胶原蛋白酶，卵磷脂酶的生理生化实验。对它们在养殖环境内源污染中 的作用进行了初步探讨。其中代谢硫化合物产H2S、还原硝酸盐和降解有机磷 化合物的主要成员是Vibrio属的细菌。Bacillus属的细菌是还原亚硝酸盐和降解 无机磷主要成员。实验中发现了具有多种生态功能的菌株，主要以Hbrio、 Stenotrophomonas和Bacillus属为主。能够分泌多种胞外酶的菌株，主要以 Vibrio、Stenotrophomonas和Bacillus属为主。它们为养殖池塘的有机物循环贡 献力量。 关键词：养殖环境、可培养细菌多样性、16S rDNA、变性梯度凝胶电泳(DGGE) AbstractBacteria Abstract Bacteria are largely responsible for the process of material recycle，energy flow，ecological balance and environment purification in Portunus trituperculatu S rearing pond．Bacteria have a straight relationship with the Portunus trituperc ulatus diseaset．In order to study the relationship between the disease outbreak and distribution of bacteria in aquaculture environment,the quantity and tom position of bacteria was investigated from water column of Meishan Ponunus trituperculatus rearing pond in October．Bacteria diversity was investigated in re aring environment of Portunus trituperculatus by means of the characteristics of morphology of colony,PCR，DGGE(denaturing gradient gel electrophoresis)a nd other modem molecular biology technology．A total of 240 strains of bacte ria werc isolated and purified from rearing environment of Portunus tritupercu latus by serially plate dilution,and primary clustered into 15 groups based on colony characteristics，and 31 subgroups on cell characteristics，Further resell[ ch Was fo