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PAGE PAGE 5 《基因操作原理》课程教学大纲 课程编码： 13019 课程名称： 基因操作原理 课程英文名称： Princeples of Gene Manipulation 先修课程： 生物化学、遗传学、 分子生物学等 适用专业： 生物技术 生物科学 总学时：56 讲课学时 56 实验学时 0 实习学时 0 总学分：3.5 一、课程性质、地位和任务 “基因操作原理”是伴随着生物学尤其是分子生物学的飞速发展而兴起的一门新学科。重点介绍基因操作中的工具酶及其种类、活性和用途；质粒载体、λ噬菌体载体和表达载体等的基本构成、种类和用途；重组DNA导入细菌和真核细胞的方法；DNA、RNA和蛋白质的分离及检测技术；定点诱变技术； PCR技术原理及其应用；cDNA文库和基因组文库的构建；分子杂交原理和技术； DNA序列分析的原理，通过Internet进行序列分析处理以及数据的获取。本门课程开设的指导思想在于使学生在掌握一般生物学以及分子生物学知识的基础上，掌握DNA重组，转移、表达和检测等技术的基本概念和基本原理，为日后从事基因工程和分子生物学研究打下技术操作方面的理论基础。”分子克隆技术”是与本课程配套的实验课程。 二、课程基本要求 能对以基因克隆和表达为主线的基因操作自行设计技术路线， 要求学生随着科学研究和技术的发展，及时掌握新的知识和方法。 本课程涉及到生物学的一些重要课程，如：普通生物学、生物化学、微生物学、遗传学和分子生物学，因此要学生选修这些课程之后，再选修本课程。如果能做到理论与实验并至，将能巩固所学知识。重点要求学生掌握在核酸水平上进行研究的基本方法。 三、教学内容及安排 绪论：基因操作的理论基础（2学时） 本章重点与难点: 掌握与基因操作有关的基本概念 0.1基因的概念 0.1.1 什么是基因 0.1.2基因与其产物的共线性及非共线性 0.1.3 基因的重叠与可变性 0.2基因的结构组成 0.2.1启动子 0.2.2 SD序列 0.2.3 转录终止区 0.2.4 其它 0.3基因克隆的通用策略 0.3.1 基本步骤 0.3.2 亚克隆 基因操作工具酶 (10学时) 本章重点与难点: 要求掌握和了解限制酶与常用工具酶的种类\活性和用途, 让学生知道“基因操作原理”是靠什么“工具”来完成的。 1.1 限制酶 1.1.1限制酶的发现及其命名 1.1.1.1 现象 1.1.1.2 限制酶的发现及其命名 1.1.1.3 限制与修饰系统的种类 1.1.2限制酶识别的序列 1.1.2.1长度 1.1.2.2结构 1.1.2.3切割位置 1.1.2.4特殊系列 1.1.3 限制酶产生的末端 1.1.3.1粘性末端 1.1.3.2平端 1.1.3.3非对称突出端 1.1.3.4同裂酶 1.1.3.5同尾酶 1.1.4末端长度对切割的影响 1.1.5位点偏爱 1.1.5.1现象 1.1.5.2原因 1.1.6酶切反应条件 1.1.6.1缓冲液 1.1.6.2反应温度 / 时间 1.1.6.3反应终止 1.1.7星星活性 1.1.8单链DNA的切割 1.1.9酶切位点的引入(酶切水平) 1.1.9.1方式 1.1.9.2沉默突变 1.1.10 影响活性的因素 1.1.11 酶切位点在基因组中分布不均一性 1.2甲基化酶 1.2.1甲基化酶的种类 1.2.1.1dam/dcm甲基化酶 1.2.1.2EcoRI甲基化酶 1.2.1.3SssI甲基化酶 1.2.1.4其它甲基化酶 1.2.2依赖于甲基化的限制系统 1.2.3甲基化对限制酶的酶切影响 1.2.3.1修饰酶切位点 1.2.3.2产生新的酶切位点 1.2.3.3甲基化位点的分布及对基因组作图的影响 1.3 DNA聚合酶 1.3.1大肠杆菌DNA聚合酶 1.3.2 Klenow 酶 1.3.3 T4噬菌体DNA聚合酶 1.3.4 T7噬菌体DNA聚合酶 1.3.5 耐热DNA聚合酶(第7章中详细介绍) 1.3.6反转录酶 1.3.7末端转移酶 1.4其它工具酶 1.4.1 RNA聚合酶 1.4.2 连接酶 1.4.2.1 T4 DNA连接酶 1.4.2.1大肠杆菌连接酶 Taq DNA连接酶 T4 RNA连接酶 1.4.3 T4多核苷酸酶 1.4.4碱性磷酸酶 1.4.5核酸酶 1.4.5.1 DNA酶 1.4.5.2 RNA酶 1.4.6 RNA酶抑制剂 1.4.7琼脂糖酶 1.4.8 DNA单链结合蛋白 1.4.9其它 分子克隆载体(14学时) 本章重点与难点: 重点掌握质粒、λ噬菌体、粘粒和M13噬菌体的组成结构和用作基因克隆的工作原理，了解其它克