基因工程基本操作程序1.pptVIP

自学提纲 1、获取目的基因的常用方法有哪些？ 2、PCR技术的原理、条件和过程。 3、基因表达载体的结构及各结构的作用如何？ 4、将目的基因导入植物细胞、动物细胞和微生物细胞的方法分别有哪些？ 5、如何进行目的基因的检测和坚定？ 2、将目的基因导入动物细胞 （1）方法：显微注射法 （2）程序： 3、将目的基因导入微生物细胞 （1）思考：为什么选用微生物作为受体细胞？ （2）方法：Ca2+ 多细胞生物的检测，将每个受体细胞单独培养并诱导发育成完整个体，检测这些个体是否摄入目的基因，摄入的基因是否表达（是否表现出相应的性状）。淘汰无变化的个体，保留有相应变化的个体进一步培养、研究。 * §1.2 基因工程的基本操作程序 基因工程基本操作的四个步骤 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 一、目的基因的获取 1、获取目的基因的常用方法有哪些? （1）直接分离法——从基因文库中获取 （2）人工合成法——反转录法和化学合成法 ※ 基因文库 基因组文库 部分基因文库（如：cDNA文库） 1、 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 3、条件：_______________________、 _______________、___________ (做启动子)、 ___________.前提条件： 2、原理： 4、方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循环的次数） 5、结果： 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA半保留复制 已知基因的核苷酸序列 四种脱氧核苷酸 一对引物 DNA聚合酶 指数 2n 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 利用PCR技术扩增目的基因 IMN 变性 复性 延伸 PCR技术扩增过程 a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下， 断裂，形成_______ b、复性（55℃-60℃）：系统温度降低，引物 与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在TaqDNA聚合酶的作用下延伸，合成与模板互补的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 1.用一定的_________切割 质粒，使其出现一个切 口。 2.用_____________切断目 的基因，使其产生_____ ________。 —— 核心 3.将切下的目的基因片段插入质粒的______处， 再加入适量___________，形成了一个重组 DNA分子（重组质粒） 限制酶 同一种限制酶 的末端 切口 DNA连接酶 相同 二、基因表达载体的构建 基因表达载体的组成： 目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 三、将目的基因导入受体细胞 转化 —— 方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态细胞 目的基因进入_________内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表达 1、将目的基因导入植物细胞的方法：农杆菌转化法 （1）农杆菌介绍 （2）原理及适用范围 四、目的基因的检测与鉴定 ——检查是否成功 检测 鉴定—— ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 方法—— 方法—— 方法—— DNA分子杂交 分子杂交（注意与上不同之处） 抗原—抗体杂交 　　例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。 从个体水平鉴定 DNA分子杂交示意图 采用一定的技术手段，将两种生物的DNA分子的单链放在一起，如果这两个单链具有互补的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区；在没有互补碱基序列的部位，仍然是两条游离的单链。 *