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基因工程简介 (一轮复习） * * 第三章 第四节 一 基因工程的基本内容 主要内容 1）基因工程的概念 2）基因操作的工具 3）基因操作的基本步骤 一个原理 二个工具酶 三个工具 四个步骤 （一）基因工程的概念 实质(原理） 结果 目的 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 基因重组 定向改造生物性状 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 与运载体DNA拼接 导入 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？ “基因剪刀” “基因针线” “运载体” 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ （二）基因操作的工具 基因的剪刀——限制性内切酶 基因的针线——DNA连接酶 基因的运载工具——运载体 一、基因的剪刀——限制性内切酶（简称限制酶） 1、存在：微生物 2、作用：识别特定的DNA序列并切断 3、特点：特异性。 4、种类：200多种 限制酶 限制酶 黏性末端 ①该限制酶识别的核苷酸序列为： ②该限制酶识别的切点是： ③该限制酶剪切的化学键是： GAATTC GA 磷酸二酯键 二、基因的针线——DNA连接酶 （二）基因操作的工具 DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，即把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的DNA分子就形成了。 外源基因(如抗虫基因)怎样才能导入受体细胞(如棉花细胞)？ （二）基因操作的工具 三、导入过程需要运输工具——运载体 运载体的作用有哪些？ 作用一：作为运载工具，将外源基因(抗虫基因)转移到受体细胞(棉花细胞)中去。 作用二：利用运载体在受体细胞(棉花细胞)内，对外源基因(抗虫基因)进行大量复制。 作为运载体必须具备哪些条件？ （二）基因操作的工具 1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 2）具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 3）具有某些标记基因，便于进行筛选。 如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。 基因的运载工具——运载体： （二）基因操作的工具 常用的运载体主要有两类： 1）细菌细胞质的质粒(最常用)?细菌 2）噬菌体?细菌 动植物病毒?动植物细胞 质粒： （二）基因操作的工具 习惯上用来专指细菌、酵母菌和放线菌等生物中核以外的小型环状DNA分子。 质粒是基因工程最常用的运载体。 四个基本步骤： （三）基因操作的基本步骤 1）目的基因的提取 2）目的基因与运载体结合 3）将目的基因导入受体细胞 4）目的基因的检测和表达 目的基因 （三）基因操作的基本步骤 目的基因是人们所需要转移或改造的基因。 如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。 目的基因的提取方法 （三）基因操作的基本步骤 直接分离基因 人工合成基因 反转录法 根据已知的氨基酸序列合成DNA ：鸟枪法 供体生物细胞 取出DNA 用限制酶剪去多余部分 目的基因 提取目的基因的方法 　用限制酶切断成许多片段 ⑴直接分离基因——鸟枪法 ⑵人工合成基因法 DNA合成仪 有两种方法：　　　①逆转录法： mRNA?DNA单链?DNA双链 ②直接合成法： 蛋白质的氨基酸顺序? 信使RNA核苷酸顺序? 基因DNA的脱氧核苷酸顺序?人工合成基因 （三）基因操作的基本步骤 步骤二：目的基因与运载体结合 （三）基因操作的基本步骤 常用的受体细胞： 有大肠杆菌、枯草杆菌、 土壤农杆菌、酵母菌和动植 物细胞等。 将目的基因导入受体细胞的原理 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 步骤三：目的基因导入受体细胞 导入 扩增 （三）基因操作的基本步骤 1）将细菌用CaCl2处理，以增大细菌细胞壁的通透性。 2）使含有目的基因的重组质粒进入受体细胞。 3）目的基因在受体细胞内，随其繁殖而复制，由于细菌繁殖的速度非常快，在很短的时间内就能获得大量的目的基因。 步骤三：目的基因导入受体细胞 （三）基因操作的基本步骤 步骤四：目的基因的检测和表达 四环素 抗性基因 青霉 素抗性基因 检测导入与否?标记基因 检测表达与否?是否有基因产物 无表达产物 无表达产物 有表达产物 无表达产物 　　细菌的检测，将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的菌落，保留有表达产物的进一步培养、研究。