亮氨酸调控猪肝脏氨代谢的作用机制研究动物营养与饲料科学专业论文.docxVIP

亮氨酸调控猪肝脏氨代谢的作用机制研究目 亮氨酸调控猪肝脏氨代谢的作用机制研究 目 录 摘 要 i Abs仃act ．iii 缩略语表 v 第一部分文献综述 ．1 1日U舌 一l 2肝脏分区与氨的代谢 2 2．1肝脏的分区与功能 ．2 2．1．1肝脏的结构分区 2 2．1．2肝脏功能分区 3 2．2肝脏氨来源及分区代谢 ．4 2．2．1肝脏氨的来源 5 2．2．2肝脏氨的分区代谢 6 3肝脏氨代谢调控研究进展 7 3．1尿素循环的调控 ．7 3．1．1 pH对尿素循环的调控 一8 3．1．1去乙酰化酶对尿素循环的调控 8 3．1．2内分泌激素对尿素循环的调控 ．10 3．1．4营养素对尿素循环的调控 ．10 3．1．5转录因子在尿素循环调控中的作用 ．11 3．2谷氨酰胺循环的调控 ll 3．2．1谷氨酰胺酶的调控作用 ．1l 3．2．2谷氨酸脱氢酶的调控作用 ．12 4猪肝脏氨基酸代谢及对氨的作用 ．．12 4．1肝脏氨基酸的代谢特点 13 4．1．1必需氨基酸在肝脏的代谢 ．13 4．1．2非必需氨基酸在肝脏的代谢 ．14 万方数据 华中农业大学2016届硕士研究生学位(毕业)论文4．2肝脏氨基酸对氨代谢的影响 华中农业大学2016届硕士研究生学位(毕业)论文 4．2肝脏氨基酸对氨代谢的影响 14 4．2．1氨基酸对氨代谢的底物驱动 ．14 4．2．2氨基酸对氨代谢的营养调控 ．15 5猪门静脉灌注技术及应用 15 6研究的目的意义 ．．16 第二部分试验材料与方法 l 7 l材料及仪器 ．．17 1．1试验动物 l 7 1．2试验材料 1 7 1．2．1试验试剂 ．1 7 1．2．2试验耗材 ．1 8 1．2．3手术器械包 ．1 8 1．3试验仪器 l 8 2试验方法 ．．19 2．1门静脉．肝静脉血管插管的安装 ．19 2．1．1动物术前的处理 ．19 2．1．2动物诱导麻醉 ．19 2．1．3保定动物 ．19 2．1．4动物呼吸麻醉 ．1 9 2．1．5备皮 ．19 2．1．6开创 ．20 2．1．7门静脉一肝静脉插管的安装 20 2．1．8插管固定 一21 2．1．9术后护理 ．．2l 2．2仔猪门静脉灌注与样品采集 21 2．2．1门静脉氨基酸与NH4CI灌注量的确定 21 2．2．2氨基酸和NH4CI溶液的配制 23 2．2．3仔猪门静脉灌注 ．23 II 万方数据 亮氨酸调控猪肝脏氨代谢的作用机制研究2．2．4样品采样 亮氨酸调控猪肝脏氨代谢的作用机制研究 2．2．4样品采样 ．23 2．3基于LC．MSMS的氨基酸定量检测 ．．24 2．3．1样本前处理 ．24 2．3．2试验参数 ．24 2．3．3上机检测 ．25 2．4实时荧光定量PCR检测 ．．26 2．4．1肝组织总RNA的提取和检测 26 2．4．2 cDNA的制备 ．．26 2．4．3实时荧光定量PCR 一27 2．5 SIRT4蛋白表达量的检测 28 2．5．1猪肝组织蛋白样品制备 ．28 2．5．2聚丙烯酰胺凝胶电泳 ．29 2．6猪肝脏代谢酶活性的测定 30 2．7肝静脉尿素氮及葡萄糖的测定 30 2．8数据分析 3 1 第三部分结果与讨论 32 第一章亮氨酸对门静脉血氨代谢的调控作用 ．32 l前言 ．．32 2结果与分析 32 2．1亮氨酸对肝脏尿素生成的影响 ．32 2．2亮氨酸对肝脏氨基酸生成的影响 ．33 2．2．1亮氨酸对肝脏谷氨酸和谷氨酰胺生成的影响 33 2．2．1亮氨酸对其它非必需氨基酸生成的影响 35 2．3亮氨酸对肝脏氨代谢酶活及基因表达的影响 ．36 2．4亮氨酸对肝脏线粒体SIRT4基因表达的影响 ．37 3讨{仑 ．37 4小结 ．39 第二章亮氨酸对丙氨酸来源氨代谢的调控作用 ．40 III 万方数据 华中农业大学2016届硕士研究生学位(毕业)论文1前言 华中农业大学2016届硕士研究生学位(毕业)论文 1前言 40 2结果与分析 40 2．1亮氨酸对肝脏尿素和葡萄糖生成的影响 ．40 2．2亮氨酸对肝脏氨基酸生成的影响 ．4l 2．2．1亮氨酸对肝脏谷氨酸和谷氨酰胺生成的影响 ．4l 2．2．2亮氨酸对其它非必需氨基酸生成的影响 ．43 2．3亮氨酸对肝脏氨代谢酶活及基因表达的影响 ．44 2．4亮氨酸对肝脏线粒体SIRT4基因表达的影响 45 3讨论 45 4小结 46 第三章亮氨酸对混合氨基酸来源氨代谢的调控作用 ．47 1前言 ．．47 2结果与分析 47 2．1亮氨酸对肝脏尿素生成的影响 ．47 2．2亮氨酸对肝脏氨基酸生成的影响 ．48 2．2．1亮氨酸对肝脏谷氨酸和谷氨酰胺生成的影响 ．48 2．2．2亮氨酸对其它非必需氨基酸生成的影响 ．49 2．3亮氨酸对肝脏氨代谢酶活及基因表达的影响 ．