tgev感染pk15细胞的蛋白质组学及诱导炎症反应的分子机制预防兽医学专业论文.docxVIP

分类号 分类号 密级 华中农业大学博士学位论文 TGEV感染PK-15细胞的蛋白质组学及诱导炎症反应的 分子机制 PRoTEoMICS AND MoLECULAR MECHANISMS OF INFLAMMATORY RESPoNSE IN TGEVr-INFECTED PK．15 CELLS 博士研究生： 安康 学 号： 2012302010032 指导教师 ： 方六荣 教授 指导小组 ： 方六荣 教授 肖少波 教授 罗 锐 副教授 王荡 讲师 专业：预防兽医学 研究方向：动物病毒分子生物学 获得学位名称：农学博士 获得学位时间： 2015年6月 华中农业大学动物科技学院动物医学院 二。一五年六月 万方数据 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 是否保密 雷 如需保密，解密时间 年 月 日 独创性声明 1嗍嬲必 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 丙使用过的材料，指导教师对此进行了审定。与我一问工作的同志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意。 研究生签名： 县j融 时间：Ⅵf岁年 6月 』日 学位论文使用授权书 本人完全了解华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定，即学生必须按照学 校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷版和电子版， 并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位 论文。本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全 部或部分内容，为存在馆际合作关系的兄弟高校用户提供文献传递和交换服务，同时 本人保留在其他媒体发表论文的权力。 注：保密学位论文(即涉及技术秘密、商业秘密或申请专利等潜在器要提交保密的论 文)在解密后适用于本授权书。 学位论文作者签名： 熔 导师签名：一二方袁菜‘ 签名日期：h町f年6月j日 签名日期：2 o r歹年 歹月．f日 万方数据 TGEV感染PK-15细胞的蛋白质组学及诱导炎症反应的分子机制目 TGEV感染PK-15细胞的蛋白质组学及诱导炎症反应的分子机制 目 录 摘 要 i Abstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．，，．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．iii 缩略语表(Abbreviation) ．v 第1章文献综述 l 1．1猪传染性胃肠炎病毒 l 1．1．1 TGEV的基因组结构 ．1 1．1．2主要编码的蛋白及其功能 ．2 1．1．3 TGEV的感染致病机理 ．3 1．1．4 TGEV的感染免疫 ．．4 1．2蛋白质组学研究技术 4 1．2．1蛋白质组学在病毒学中的应用 ．5 1．2．2同位素标记相对与绝对定量(iTRAQ)技术 ．5 1．3抗病毒天然免疫信号转导 7 1．3．1 TLRs介导的信号转导 一8 l-3．2 RLRs介导的信号转导 一9 1．4 I型干扰素信号通路 12 1．4．1干扰素介导的JAK-STAT信号转导 12 1．4．2抗病毒效应分子 ～13 1．5 NF．wB信号通路 ．15 1．5．1 NF．r,B／Rel家族 16 1．5．2 Ir,B蛋白家族 16 1．5．3 IKK蛋白激酶 ．．17 1．5．4 NF—r,B的激活 18 1．6 MAPK信号通路与炎症反应 ．18 第2章TGEV感染PK-15细胞的蛋白质组学研氟 ．20 2．1研究目的与意义 ．20 2．2实验材料 20 2．2．1细胞、毒株 20 2．2．2主要试剂 一20 2．2．3抗体及Western blot所需实验材料 21 2．2．4细胞培养基及其配置 21 2．2．5主要缓冲液与相关试剂及其配置 21 2．2．6主要实验仪器及设备 23 2．2．7分子生物学信息软件 23 2．3实验方法 一23 2．3．1猪传染性胃肠炎病毒的增殖 23 2．3．2病毒滴度的测定 一24 2．3．3用于蛋白质组学分析的细胞样品的制备 24 2．3．4全细胞蛋白质的提取 25 2．3．5蛋白质的酶解 ～25 2．3．6 iTRAQ 8 plex试剂标记肽段 25 2．3．7 scx分离 。26 万方数据 华中农业大学2015届博士研究生学位论文2．3．8基于Triple 华中农业大学2015届博士研究生学位论文 2．3．8基于