ss表达质粒对肿瘤细胞增殖与凋亡的影响及调节机制研究动物遗传育种与繁殖专业论文.docxVIP

生长抑素基因转染三种肿瘤细胞后的凋亡与增殖变化及其调节机制研究摘要 生长抑素基因转染三种肿瘤细胞后的凋亡与增殖变化及其调节机制研究 摘要 肿瘤是目前所有疾病中威慑力最大的疾病，愈来愈引起人们的重视。因此，研 发高效低毒的抗肿瘤药物已成为当前科研工作者的迫切任务。生长抑素因其抑制生 长特性，及其广泛分布的受体而备受关注。近年来研究表明，生长抑素及其类似物 对肿瘤细胞不但具有抑制增殖的作用，还能诱导其凋亡。本实验将两种生长抑素真 核表达质粒(pcS／2SS和pEGS／2SS)转染三种癌细胞、即人宫颈癌细胞(Hela)、人 乳腺癌细胞(MCF．7)、人肝癌细胞(HepG．2)，旨在：(1)分析这两种质粒能否在 真核细胞中表达，为开发促生长的基因疫苗奠定基础；(2)探讨并比较这两种生长 抑素重组质粒对肿瘤细胞增殖或凋亡的作用及其机制，为开发治疗肿瘤的基因治疗 新技术奠定基础。研究内容和结果如下： 1 SS表达质粒成功转染肿瘤细胞并表达目的蛋白 SS表达质粒热击法转化大肠杆菌DH5伐后，大提所得质粒浓度分别为pcS／2SS， 1629．7ng／gL；pEGS／2SS，1526．9ng／儿；pcDNA3．0，2072．4 ng／gL；pEGFP—N1，1770．4。 ng／gL。 SS表达质粒脂质体转染Hela细胞、MCF．7细胞、HepG．2细胞24h后，通过RT-PCR 在转录水平能检测到生长抑素目的基因，且荧光显微镜观察到绿色荧光，表明质粒’ 转染成功，顺利表达生长抑素融合蛋白。 2 SS表达质粒转染肿瘤细胞后抑制细胞增殖 MTT法检测细胞的增殖情况，Hela细胞转染质粒pcS／2SS、pEGS／2SS组与空白 对照组相比抑制率分别为33．590／硅3．60％，28．08％士1．32％；与阴性对照组相比抑制率 分别为12．09％±1．51％，5．50％1：2．12％；HepG．2细胞转染质粒组与空白对照组相比抑 制率分别为27．12％硅2．06％，27．64％：t=1．44％；与阴性对照组相比抑制率分别为6．65％ ±O．72％，3．29％+1．47％；MCF．7细胞转染质粒组与空白对照组相比抑制率分别为 38．64％4-1．52％，37．40％4-1．90％；与阴性对照组相比抑制率分别为13．320／社1．34％， 16．97％1．73％；结果表明细胞在转染质粒后增殖均受到抑制。 细胞转染质粒后48h，流式细胞仪检测细胞周期变化情况。与空白对照相比， Hela细胞转染质粒组G0／G1期细胞比例基本不变，S期细胞比例显著降低，G2／M期细 胞比例显著升高(pn∞)；HepG2细胞转染质粒后，细胞周期产生变化，但各组差 华中农业大学201l届硕士学位论文异不显著；MCF．7细胞转染质粒组G0／G1期细胞比例基本不变，S期细胞比例显著升 华中农业大学201l届硕士学位论文 异不显著；MCF．7细胞转染质粒组G0／G1期细胞比例基本不变，S期细胞比例显著升 高，G2／M期细胞比例显著降低(pn∞)。 3 SS表达质粒转染肿瘤细胞后诱导细胞凋亡 细胞转染质粒后48h，流式细胞仪检测细胞凋亡，Hela细胞空白对照组，转染 pcS／2SS、pcDNA3．0、pEGS／2SS、pEGFP-NI实验组细胞凋亡率分别为2．070／硅2．88％、 17．52％士1．49％、12．15％士5．14％、16．350／社1．82％、13．210／社1．32％；HepG．2细胞凋亡 率分别为0．750／硅1．03％、27．620／壮1．50％、22．930／社3．49％、26．350／社2．3 1％、 22．150／硅1．54％；MCF．7细胞凋亡率分别为4．880／社1．62％、25．06％士1．52％、 21．50％士4．29％、28．61％士1．76％、22．58％_-1：3．21％；结果表明：(1)转染质粒组与空 白对照组相比，转染质粒组可显著提高细胞凋亡率(pO．01)；(2)试验组与阴性对 照组相比，试验组细胞凋亡率更高，但差异不显著；(3)HepG．2、MCF．7组相对于 Hela细胞组凋亡率更高，且差异显著(pD．∞)。 细胞转染质粒后48h，用实时荧光定量PCR检测分析凋亡相关基因，Hela细胞 转染质粒组细胞凋亡促进基因(Bax、原癌基因p53)的表达量显著增加，凋亡抑制 基因bcl-2的表达量降低；HepG2细胞凋亡抑制基因bcl．．2和凋亡促进基因Box、p53、 NFKB表达量都上调，但差异不显著；MCF．7细胞凋亡促进基因(Box、原癌基因 p53)的表达量显著增加，凋亡抑制基因bcl-2和NFKB的表达量降低。结果表明， 细胞凋亡过程中，凋亡相关基因都发生变化，表明细胞凋亡是多通路相互作用的结 果。 以上结果表明，