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植物组织中丙二醇含量的测定 一、实验目的 熟练掌握丙二醇含量测定的原理和方法 掌握冷冻离心机的使用方法 二、实验原理 植物器官衰老时，或在逆境条件下，往往发生膜脂过氧化作用，丙二醛（malondialdehyde,MDA）是其产物之一，通常利用它作为脂质过氧化指标，表示细胞膜脂过氧化程度和植物对逆境条件反应的强弱。 MDA在高温、酸性条件下与硫代巴比妥酸（TBA）反应，形成在532nm波长处有最大吸收的有色三甲基复合物，该复合物的吸光系数为155mm/(L?cm)，并在600nm波长处有最小吸光度。 可按公式 A532－A600=155000×C×L 公式（1） 算出MDA浓度(μ,mol/L),进一步算出单位质量组织中MDA含量(μ,mol/L)。式中A532和A600分别表示532nm和600nm波长处的吸光度。L为比色杯的厚度（cm）。 需要注意的是，植物组织中糖类物质对MDA-TBA反应有干扰作用。可用公式消除误差 C（μmol/L）=6.45（A532－A600）－0.56A450 公式（2） 式中： A532 、A600、A450分别表示450nm、532nm和600nm波长下的吸光度。 三、材料、仪器设备及试剂 材料 植物叶片 仪器设备 研钵、试管、可调加样器、恒温水浴锅、冷冻离心机、分光光度计 试剂 5%三氯乙酸（TCA）、0.67%（W/V）硫代巴比妥酸（TBA） 用10%的TCA配制 四、实验步骤 新鲜叶片，去污，剪碎，混匀 称三份，0.5g左右 分别置于三只研钵中，加5%TCA研磨 所得匀浆在3000r/min下离心10min 取上层清液2ml，加0.67%TBA 2ml，混匀后在100℃水浴上煮沸30min，冷却后再离心一次 分别测定上清液在450nm、532nm和600nm处的吸光值。并按公式（2）算出MDA浓度 五、思考题 第二次离心起什么作用？ 哪些因素会影响MDA含量测定结果？ * * *