第二章 色谱技.pptVIP

第二章 色谱技术 2.1 色谱法的基本原理 色谱法：利用混合物中各组分在两相中分配系数不同，当流动相推动样品通过固定相时，在两相中进行连续反复、多次分配，从而形成差速移动，达到分离。 2.1.1 色谱法分类： 1) 按固定相及流动相的状态分类：液相色谱、气相色谱 2) 按固定相形状性质分类：柱色谱、纸色谱、薄层色谱 3) 按色谱过程的机理分类： 吸附色谱：用固体吸附剂作固定相，利用组分在吸附剂上吸附力的不同，因而吸附平衡常数不同而将组分分离 分配色谱：用液体作固定相，利用组分在液相中的溶解度不同，因而分配系数不同进行分离 离子交换色谱：利用离子交换原理 排阻色谱：利用分子大小不同 电色谱：利用带电物质在电场作用下移动速度不同进行分离 4) 亦可按仪器分: a 气相色谱( Gas chromatography ) 填充柱气相色谱（Packed column gas chromatography） 毛细管气相色谱 (Capillary column gas chromatography) 裂解气相色谱(Pyrolysis gas chromatography ) 顶空气相色谱 ( Headspace gas chromatography) 气相质谱联用技术（Gas chromatography-Mass spectrometry） b 液相色谱仪( Liquid chromatography ) 高效液相色谱( High performance liquid chromatography) 超临界流体色谱( Supercritical fluid chromatography) 高效毛细管电泳(High performance capillary electrophoresis) 毛细管电色谱(Capillary electrochromatography) 液相质谱联用技术（Liquid chromatography- Mass spectrometry c 平面色谱法（Planar chromatography） 薄层色谱 ( Thin layer chromatography) 薄层电泳色谱 (Thin layer electrophoresis ) 纸色谱( Paper chromatography) 2.1.2 色谱图的重要参数 1.色谱峰 峰宽（W或Y）半峰宽（W1/2,Y1/2), 峰高（H） 标准偏差(σ)Y＝4σ,亦称曲折点 峰宽，即峰高0.607处峰的宽度。 2.时间保留值 死时间t0， 保留时间tR， 校正保留时间tR’＝ tR - t0 3.体积保留值 死体积V0= t0Fc，Fc-流动相的流速 保留体积VR= tRFc， 校正保留体积VR’= tR’Fc 4. 相对保留值（分离因子，α）α＝tR1’/tR2’ 5. 分配比（K’)和相比（β） 分配比是指平衡时，组分在固定相和流动相中的重量比 6.分配系数(K) 在一定温度时, 达到分配平衡后, 组分在固定相中的浓度(Cs)与在流动相中的浓度(Cm)之比为分配系数. 物理意义： 1. tR相同（±2％以内）或相对保留时间相同的是同一物质 2. σ，Y1/2,Y也是定性的主要参数 3. 峰面积和峰高是定量的主要参数 峰面积越大，峰高越高，含量越高 当tR较短，用峰高作定量的根据 当tR较长，用峰面积作定量根据 4.峰宽或半峰宽是衡量柱效的指标或参数。 5.谱带宽度越窄，表明柱效越高。 对于GC，用选择固定液的办法。对于LC，用选择流动相配比的办法。再加上程序升温（GC）或梯度淋洗（LC）等技术，将是提高分离度的有效办法。 2.1.3 塔板理论 塔板理论是Martin和Synger首先提出的色谱热力学平衡理论。它把色谱柱看作分馏塔，把组分在色谱柱内的分离过程看成在分馏塔中的分馏过程，即组分在塔板间隔内的分配平衡过程。 理论塔板数： N＝L/H=16( )2=5.54( )2 N的物理意义： 说明组分在柱中反复分配平行的次数的多少，N越大，平衡次数越多，组分与固定相的相互作用力越明显，柱效越高。 色谱峰→窄，塔板数n→多，理论塔板高→小，柱效能→高。因而n或h作为描述柱效能的一个指标。 2.2 气相色谱 定义：气相色谱是用气体作为流动相的色谱法。 GC特点：