酶活性的测定..ppt

过氧化物酶(ＰＯＤ)活性的测定　　　　　　　　—愈创木酚法;二、材料和设备;三、实验步骤;２、过氧化物酶活性的测定 酶活性测定的反应体系包括:2.9ml 0.05mol/L磷酸缓冲液、1.0ml 2%H2O2、1.0ml 0.05mol/L 愈创木酚和0.1ml酶液。 以在沸水中加热5min的酶液为对照，做二组重复实验。反应体系加入酶液后，立即于37℃水浴中保温15min，然后迅速转入冰浴中，并加入2.0ml 20%三氯乙酸终止反应。然后，过滤(或5000g 离心10min),滤液适当稀释，用751型分光光度计在470nm波长下测定反应体系的吸光度。;四、实验结果;CAT过氧化氢酶活性测定方法;;过氧化氢酶的应用：;过氧化氢酶的测定：;高锰酸钾滴定法：;; ;方法比较： 研究认为，化学滴定法重复性差、紧密度低、操作繁琐、检测线低，不适于大批量的样品测定。其优点是不需要任何特殊的仪器，适用性比较广泛。 紫外分光光度法具有重现性好，操作简单、快速、检测线相对较低得到优点。但是对于测定底物或产物改变量方面不太准确。 ; 总结：;抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性测定 ——在茶叶中;实验原理;APX酶液的制备;APX活性的测定;计算公式;测定茶树鲜叶APX活性的最佳条件;注意事项：;超氧化物歧化酶（SOD）的活性测定;黄嘌呤氧化酶法;实验试剂： 硫酸盐缓冲液，盐酸羟胺，黄嘌呤，黄嘌呤氧化酶，醋酸等。;实验步骤：;计算方法：;邻苯三酚自氧化法;1.试剂： 0.1mol/L Tris-HCl 缓冲液(pH8.2内含 2mmol/L EDTA)0.2mol/L （Tris）三羟甲基氨基甲烷(内含 4mmol/L 乙二胺四乙酸EDTA )100ml 与 0.2mol/L HCl44.76ml 混合加双蒸水至 200ml调 pH8.2±0.01;邻苯三酚(45mmol/L)以 10mmol/LHCl 配制成 6mmol/L溶液存放于冰箱备用。 2.仪器: 紫外分光光度计，酸度计，恒温水浴锅;实验步骤：;.SOD活性测定： 将样液加入到Tris缓冲溶液中，其余步骤同自氧化速率测定方法。 活力单位定义：将一定条件下使每毫升反应液自氧化速率抑制50%的酶量定义为一个单位（u）。