微生物检验技术介绍.pdf

微生物检验技术 XLD 琼脂 （Xylose Lysine Desoxycholate Agar ） Contents 1 一、培养基的制备技术 2 二、无菌技术 3 三、纯培养技术 4 四、显微技术 5 五、生化鉴定 一、培养基的制备技术 培养基 人工配制的，适合微生物生长、 繁殖或产生代谢产物的营养基质 （一）培养基的类型 1.按物理状态来分  液体培养基：不含凝固剂，利于菌体的快速繁殖、代谢和 积累产物  流体培养基：含0.05～0.07%琼脂粉，有利于一般厌氧菌 的生长繁殖  半固体培养基：含0.2～0.8%琼脂粉，多用于细菌的运动 能力观察、菌种传代保存及贮运细菌标本材料等  固体培养基：含1.5～2.0%琼脂，多用于细菌的分离、鉴 定、菌种保存及细菌疫苗制备等方面 2.按成分来分 １）天然培养基：指利用各种动、植物或微生物的原料，其 成分难以确切知道。例如：牛肉膏、麦芽汁、蛋白胨、酵 母膏、玉米粉、麸皮、各种饼粉、马铃薯、牛奶、血清等 ２）合成培养基是一类化学成分和数量完全知道的培养基， 是用已知化学成分的化学药品配制而成 ３）半合成培养基(综合培养基）：在合成培养基中，加入某 种或几种天然成分；或者在天然培养基中，加入一种或几 种已知成分的化学药品即成半合成培养基。例如马铃薯蔗 糖培养基等 3.按功能来分  选择性培养基——含有目标菌生长需要的特殊营养物质,抑 制非目标菌生长的抑制剂 选择性增菌培养基——液体 选择性分离培养基——固体  鉴别培养基——通过指示剂或指示剂和抑菌剂的共同作用 来鉴别不同类型的微生物 4.按制备方法分类  自行配制——成本相对较低，但繁琐，质量不稳定。  即用型培养基——使用方便，但保质期短。  干粉培养基——使用方便，质量稳定，易保存，推广空间 广阔。 （二）培养基中的成分 1.水：自来水、蒸馏水 2.琼脂：透明、无味，化学结构稳定，不易被微生物分解利 用，在培养基中仅起凝固剂的作用 3.氮源 （1）有机氮源 （2 ）无机氮源 硫酸铵尿素碳酸氢铵硝酸铵 氮气等 4.碳源类 5. 稀释溶液 磷酸盐缓冲液、生理盐水 、缓冲蛋白胨等 6. 无机盐 锌、钴、锰、铁、钙、铜、镁、硫、磷、钾、钠 7. 生长素 氨基酸、嘌呤、嘧啶、维生素等 8 有鉴别指示作用的成分  pH指示剂 观察各种细菌对糖、醇和苷类等碳水化合物的发酵 反应  糖、醇、苷类 用以鉴别细菌的发酵。  有机酸盐类 pH值下降，使指示剂的颜色改变；铅盐沉淀  氨基酸和蛋白质 靛基质、霍乱红和硫化氢反应；蛋白胨、氨 基酸、尿素以及明胶等酶解试验  其他鉴别成分 卵磷脂（或卵黄）、磷酸酯、甘油三丁酯、吐温 等酶类水解试验。 （三）培养基的制备和使用 1. 称量和复水 2. 溶解 3.pH值调节 4.分装 5 灭菌和贮藏 煮沸 湿热灭菌或过滤除菌 添加成分 4℃冰箱 内备用 6.使用 琼脂培养基的融化 添加成分的加入 培养 弃置 二、无菌技术  几个常见的概念：灭菌、消毒、防腐  无菌技术 二. 无菌技术 1.常用器具的灭菌 常用器具：试管、烧瓶、培养皿、涂棒、 移液管、接种环等 方法：这些器具在灭菌前须先进行包扎或 装入特定容器中。 （1）高压蒸汽灭菌 0.1MPa 121.3℃ 15~30min （2 ）高温干热灭菌 160~170℃ 2h （3）烧灼灭菌 2.培养基的灭菌  高压蒸汽灭菌  过滤灭