逆流液相色谱 - 副本..pptVIP

原理特征 逆流色谱法（CCC）：基于样品在两种互不混溶的溶剂之间的分配作用，溶质中各组分在通过两溶剂相过程中因分配系数不同而得以分离。这是一种不用固态支撑体的全液体色谱方法。 高速逆流色谱法（HSCCC） 高速逆流色谱技术的优点 例1低速逆流色谱分离制备栀子黄色素中的藏花素 藏花素具有广谱抗癌活性，对白血病、卵巢癌、结肠癌、横纹肌肉瘤和软组织肉瘤等都具有较强的抑制作用，而对正常细胞几乎无毒性 正交实验 固定相保留率越高对分离越有利，因此最佳转速选为50r／min。流动相的流速不但影响分离时间，而且也会对分离度产生一定的影响。在其他参数相同的条件下，流速越大，分离时间越短，但是固定相保留率越小，分离度就越小。因此流速选择要尽可能保证固定相保留率和分离度综合实际分离情况，本实验最佳流速选为5 mL／ min。 例2高速逆流色谱纯化白藜芦醇的研究 白藜芦醇具有多种生物学活性及药理作用， 它具有抗癌、抗菌、抗氧化、预防心脏病、降血脂和抗诱变等作用，特别是具有很强的抗肿瘤活性及对心血管系统的作用! 已经成为食品及医药行业研究的热点。 虎杖中白藜芦的提取 采用有机溶剂回流提取和超声波强化提取法。其中超声波强化提取法时间很短，可以大大缩短生产周期，且不需加热，节能高效 得出结论本实验最佳工艺条件： 白藜芦醇除杂：乙醚沉淀法 溶剂体系：氯仿：甲醇：水=4:3:2 转速850r/min 流速2ml/min 进样量5ml提取液 例3夏天无生物碱的高速逆流色谱分离纯化 夏天无具有活血通络，行气止痛的功效，主要用于治疗中风偏瘫、跌扑损伤、风湿性关节炎、坐骨神经痛等.夏天无的主要活性成分为生物碱类化合物，如原阿片碱、比枯枯灵和四氢巴马亭等。建立主要活性成分的分离制备方法，对夏天无药材及其产品的质量控制十分必要。 样品的制备 两相溶剂系统及样品溶液的制备 溶剂的选择 正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水体系下相加10 mmol／L浓HCl为溶剂系统，虽然出现平台峰，但样品的分离效果不佳；采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(5:5:2:8，v/v)上相加10 mmol／L三乙胺，下相加10 mmol／L浓HCl为溶剂系统，分离效果明显改善。但通过HPLC分析，分离效果仍不理想 例4高速逆流色谱分离纯化防风中升麻素苷和5-D-甲基维斯阿米醇苷 防风为伞形科防风属多年生草本植物,用于治疗感冒头疼、风湿痹痛、风疹瘙痒和破伤风等。2005年版《中华人民共和国药典》中，将升麻素苷和5-D-甲基维斯阿米醇苷作为防风的指标成分。现代药理研究表明，升麻素苷和5-D-甲基维斯阿米醇苷具有解热、镇痛、抗炎、抗血小板聚集等多种功效悼3 J。因此建立相关成分的高效分离纯化方法具有重要意义。 讨论溶剂系统的选择 不同的溶剂系统具有不同的上、下相之比,粘度、极性、密度等性质差异均对相同的成分产生不同的溶解、分配能力,形成分配系数的差异,对分离效果产生一定的影响 结论与展望 逆流色谱技术操作简单易行，无需对样品进行复杂处理，可在线检测出峰；可以和灵敏度高的检测技术联用，比如与质谱、电子电离质谱、化学电离质谱、快速原子轰击质谱、热喷雾质谱等的联用；应用广泛、无需固体载体，产品纯度高等优点。 不足的是消耗溶剂过多，检测限低，灵敏度较差。尽管如此，随着液相色谱的迅猛发展，HSCCC将不断创新，日臻完善。 参考文献 [1]戴德舜,王义明,罗国安,等.高速逆流色谱进展[J].分析化学评述与进展,2001,29(5):586-591 [2]刘迪,陈雪峰,宋晓宇,等.高速逆流色谱技术应用现状[J].食品与机械,2006,22(2): [3]黄秋霞,周如意,国大亮,则玉璇.高速逆流色谱法及其在药物纯化领域中的应用[J].齐鲁药事,2010,19(10):616-619 [4]郑卫,逆流色谱技术在抗生素分离纯化中的应用[J].中国抗生素杂志,2005,30(3):180-186 [5]赵淑杰,韩梅,韩忠明,李彦颖,杨利民.高速逆流色谱分离与鉴定鹿药中黄酮类化合物[J].分析化学研究简报,2009,37(9):1354-1358 [6]沈平壤.高速逆流色谱(HSCCC)技术与色谱指纹谱[J].中成药,2010,23(5):311-315 [7]曹学丽,等.高速逆流色谱技术在药物研究开发中的应用[J].世界科学技术-中医药现代,2009,9(1) 夏天无3.0 kg 粉碎过筛 加乙醇，回流 过滤,合并滤液 减压回收乙醇得浸膏 用800 mL l％HCl超声溶解,过滤 石油醚萃取脱脂 脱脂水溶液加稀氨水搅拌调节pH 9.5 沉淀,过滤,得夏天无总生物碱21.3 g，冷藏保存备用 正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(5:5:2:8,V/V)