tmp3在斑马鱼胚胎心脏发育中的初步功能研究遗传学专业论文.docxVIP

分类号 分类号 密级 学号2Q1202141188 蚴在斑马鱼胚胎心脏发育中的初步功 能研究 A smdy on the prelimin哪劬ction of凇罗 during embryonic hean deVelopment in zebrafish 研究 生姓名 指导教师姓名、职称 学 科 专 业 研 究 方 向 湖南师范大学学位评定委员会办公室 二零一五年六月 万方数据 摘 摘 要 心脏是脊椎动物在其发育过程中最早形成和最先具有功能的器 官，其发育过程受到多种基因的表达调控。这些基因的表达异常会 导致各种心脏缺陷。先天性心血管病是先天性畸形中最常见的一类， 我国每年出生婴儿患各种先天性心脏病约有15万，其中30％左右可 能在婴儿期死亡。因此，研究心脏发育的调控基因，有助于更好地 了解心脏病的发病机制以及对该类疾病的治疗。斑马鱼作为一种理 想的模式动物，具有个体小、易于饲养、发育快、繁殖能力强且胚 胎透明等优点。更重要的是，斑马鱼在解剖学上和生理学上与其它 脊椎动物有很多相同的特征，因此使用斑马鱼研究脊椎动物的发育 与遗传具有极大的优势。 本研究室的前期研究显示，斑马鱼基因嬲可能参与胚胎时 期心脏形态的发生，与A]rF4蛋白相互作用，通过作用于靶基因白纫彳 调控心脏发育。本论文以斑马鱼为模型继续研究砌基因在脊椎 动物心脏发育中的功能。 本论文分为两个阶段研究，在第一阶段，通过抗体染色分析 聊3蛋白在斑马鱼胚胎心脏发育中的表达，实验结果显示TⅧ3 蛋白在40％和50％外包时期主要在细胞核中表达，而72hpf阶段主 要在细胞膜上表达，且与ATF4蛋白相互作用。为了探究黝在 斑马鱼发育中的作用，我们设计了反义Mo印holinos寡核苷酸特异性 敲低劂的表达，删突变体表现出体长变短、尾巴卷曲；在 万方数据 48hpf可观察到明显的心脏畸形，包括环化不完全、线性化、房室管扩展、心动变缓和血液循环减少。4乃￥突变体的表型与嬲突变 48hpf可观察到明显的心脏畸形，包括环化不完全、线性化、房室管 扩展、心动变缓和血液循环减少。4乃￥突变体的表型与嬲突变 体的相似，m俨影4删双突变体的表型更加严重，表明删和 47Ⅳ可能通过相互作用共同调节斑马鱼心脏的正常发育。而共注射 国囱4 mRNA能够拯救单敲低7】坳哆或47耳≠以及双敲低7，场町和 4删导致的心脏表型，说明国卅和蚴可能在同一条信号途径 上调控斑马鱼心脏的发育。本实验室后续通过原位杂交实验发现， 敲低劂会导致国翻彳表达下调，表明6H劢4可能在劂的下 游。另外，荧光免疫实验证明了敲低嬲会导致t印omyosin(原 肌球蛋白)的表达下降，预示劂与心肌收缩性相关。在第二阶 段，本文对p而廖化啦纪2·删一次E殳脚)过表达品系和脚 敲除系进行表型分析，发现过表达蚴会导致心脏心室变小、心 房变大、环化异常等缺陷表型，而敲除嬲会导致心脏心室变小、 房室管扩展、环化异常等缺陷表型。利用M．Mode心脏生理学分析 技术，进一步证明嬲基因对心脏生理学功能起着重要的调控作 用。心脏Edu检测和n腿L检测的结果表明，蚴调控心脏细胞 的增殖。通过石蜡切片及砸染色分析表明77切哆可能调控斑马鱼 心脏瓣膜的发育。本文的研究结果为进一步研究嬲基因在脊椎 动物心脏发育中的作用机制奠定了基础。 关键词：刀I归罗，斑马鱼，心脏发育，功能研究 万方数据 ABSTRACTHeart ABSTRACT Heart is one of t11e earlieSt formative and矗mctional o唱ans of venebrate，and its devel叩mem process is regulated by Various genes． The abnonllal eXpression of mese genes may result in all kinds of cardiac defects．Congenital heart disease is the most common帅e of coI冯enital malfomation．In our co啷there are about 1 50 t110usand newbom babies su能r舶m congenital he砒disease and锄ong t11em around 3 0％probably died in infhcy．Therefore，research on the regulato巧genes of cardiac deVelopment help to better understand t11e pa廿109enesis of hearrt diseaSe，and is of great sigmficanc