trio基因在小鼠海马区发育及学习记忆中的功能研究发育生物学专业论文.docxVIP

2．3．4． 2．3．4． 对转膜后的PVDF膜进行封闭 ． ．． 22 2．3．5． PvDF膜的抗体孵育 ． ．22 2．3．6． 抗体孵育后PVDF膜显影定影 ． ．．23 2．4． Morr i s水迷宫测试 24 2．4．1． Morris水迷宫测试的准备工作 ．24 2．4．2． 获得性训练(Acquisition Phase) ．．25 2．4．3． 探查训练(Probe Trial 1) ． ．25 2．4．4． Morris水迷宫实验注意事项 ． ．．26 2．5． 场景性恐惧条件测试 ．26 2．5．1． 场景性恐惧测试步骤 ． ．．27 2．5．2． 场景性恐惧测试注意事项 ． ．28 2．6． 组织切片分析 ． ． ． ．28 2．6．1． 小鼠大脑石蜡切片步骤 ．28 2．6．2． 小鼠大脑石蜡切片H＆E染色 ．30 2．7． 数据处理及统计分析 ．31 第3章：实验结果 31 1． 厂厂，D基因在曰伽一厂厂?一J、鼠海马组织中被敲除 ．．．．．．．．．． ．．31 2．蒯，一厂厂?D手小鼠的总体形态出现异常 ．．． ．． ．． ．32 3．f碍舯一厂厂?D手成年小鼠的智力水平显著下降 ．．．．．． ．． ．．33 4．￡聊，一厂厂幻手小鼠的海马结构出现畸形 ．．．． ．．．．． ．．36 第4章：讨论 ．38 1． 小鼠的发育受到厂厂，D基因的调控 ．．． ．．40 1．1 厂厂，口基因控制小鼠大脑的发育 ． ．40 1．2 厂厂，口基因敲除影响了f聊，-厂厂，厂小鼠的体重及脑重 ．41 1．2．1 小鼠的体重受到Ⅳ，D基因的调控 ．．42 1．2．2翻饼，一乃?o．产小鼠的脑重受到厂厂，D基因敲除的影响 42 2．fZ舯一厂厂?D手小鼠的海马损伤导致小鼠的学习能力下降 ．．．． 43 2．1 小鼠的海马决定着小鼠智力水平的形成 43 2．2 厂厂，D基因的敲除导致自吖，一厂厂?D手小鼠海马的畸形及智力的下降 44 3．fZ及，，一厂厂?D_／-小鼠可为人类神经性疾病的研究提供材料 ．45 第5章：结论 ．柏 主要参考文献 ．47 攻读学位期间发表的论文 ．51 致谢 ．．51 3 万方数据 山东大学硕士学位毕业论文摘要 山东大学硕士学位毕业论文 摘要 背景介绍：在细胞的生长发育过程中，Trio蛋白是一种非常重要的鸟嘌呤核苷 酸交换因子。Trio蛋白拥有多个调节细胞生长的蛋白功能结构域。由于这些功 能域的催化作用，Trio蛋白广泛参与细胞生长中细胞骨架的动态调节及肌动蛋 白的重构过程，对细胞迁移、神经细胞生长及神经细胞轴突导向等细胞活动起着 重要的调节作用。对肼D基因在小鼠发育中功能的研究结果已表明：如删D 基因在小鼠中被完全敲除，小鼠在胚胎期时即会死亡。对这些死亡小鼠胚胎的组 织学分析显示：州D基因完全敲除小鼠胚胎在发育至E18．5天时即会出现大脑 皮层和海马结构的细胞排列紊乱及组织发育缺陷。对脂s芒如一乃jD-／讣鼠(乃jD 基因在整个神经系统中被特异性敲除的小鼠)的研究表明： 乃jD基因在神经系 统中被敲除后，所构建的舱sf抽一所D于小鼠存活率非常低，出生后即会大量死 亡，在成年前这些仔鼠会全部死亡。对出生后幸存的胎s芒如一乃jD-／讣鼠的研究 证明：这些小鼠在行为学上出现了共济失调等表型，在神经系统发育上存在着小 脑发育缺陷等一系列发育畸形性状。由于胎sf而一删D．／-小鼠在成年前会全部死 亡，无法得到成年的乃jD基因敲除小鼠以进行成体行为学实验，这限制了所。 基因在成年小鼠发育中的进一步功能研究。为解决这一问题，我们将 Trio—Floxed小鼠和觑伽钉P小鼠进行交配，最终构建了励肼一乃jD“-／J、鼠。得 到励灯一乃jD’／‘小鼠后，我们采取动物行为学、组织学和分子生物学等实验方法 对纾jD基因在小鼠发育过程中的功能进行了研究。 研究目的：通过构建倒伽一删D于小鼠模型的办法来探究乃jD基因在小鼠大脑神 经发育中所发挥的功能。通过行为学实验来探究厅而基因海马区域特异性敲除 后成年小鼠智力所受到的影响。 实验方法：将觑伽切e小鼠与Trio—F10xed小鼠进行交配得到乃jD基因的条件 性敲除小鼠即励灯一办jo于小鼠。励灯乇抛小鼠特异性地在小鼠的大脑皮层及海 马区域处表达Cre重组酶并敲除两侧插有loxP位点的纾jD基因片段。将得到的 觑伽一所厂小鼠饲养至成年，对成年小鼠进行一系列行为学测试以研究小鼠在 行而基因特异性敲除后的智力水平波动。除了行为学测试外，我们还利用其他 万方数据 实验方法，如组织学石蜡切片HE染色、Western 实验方法，如组织学石蜡切片HE染色、Western B10t等，对励灯一乃jD-／-，J、鼠 的大脑发育进行研究。小鼠大脑的组织学研