丹参酮ⅱa磺酸钠通过抑制钙调蛋白激酶ⅱ对房颤的影响内科学专业论文.docxVIP

BCA蛋白浓度测定试剂盒指示，测定蛋白质浓度，通过SDS—PAGE电泳使 BCA蛋白浓度测定试剂盒指示，测定蛋白质浓度，通过SDS—PAGE电泳使 不同分子量的蛋白分离，将蛋白转移至PVDF膜上，一抗孵育4℃过夜， 二抗孵育1 h后，加入显色剂后成像并分析处理所得图像。检测电刺激前 后以及干预前后CaMKII蛋白的表达和287号位苏氨酸(Thr 287)磷酸化 (pYhr287一C心ⅨII)蛋白水平。(3)RT-PCR实验：根据RNA提取试剂盒 说明，提取大鼠原代培养心房肌细胞中的总RNA，检测浓度以及纯度；按 照逆转录试剂盒，将mRNA逆转录为cDNA，采用SYBR Green I法实时 荧光定量PCR检测快速起搏前后以及DS．201干预前后CaMKII mRNA水 平的差异。(4)犬房颤模型建立：房颤组为犬麻醉消毒铺巾后，记录心电 图后心内起搏，以周长100 ms，2倍的阈值刺激电压为输出电压刺激心房， 快速心房起搏5～30 min，房颤图形出现，持续6 h，停止电刺激，记录犬 1h内心电图改变。干预组为房颤模型成功建立后，DS．201静脉推注2．66 mg／kg体重，持续记录心电图l h。结果： (1)快速起搏对乳鼠CaMKII 的影响：快速起搏组与对照组相比总蛋白明显升高(JP0．01)，磷酸化蛋 白升高(尸0．01)。以对照组为参考，标准化后快速起搏组CaMKII蛋白 与pThr287．CaMKII蛋白无统计学差异(胗0．05)，电刺激组mRNA高于对照 组(P0．01)。 (2)DS一201对CaMKII的影响：与快速起搏组相比，低 浓度干预组、中浓度干预组、高浓度干预组CaMKII蛋白与基因表达量明 显降低(尸0．01)，中浓度干预组低于低浓度干预组(P0．01)，高浓度干 预组低于中浓度干预组(PO．01)，高浓度干预组与对照组无差异(胗O．05)。 与快速起搏组相比，低浓度干预组pThr287一CaMKII蛋白降低(P0．01)， 与对照组相比，低浓度干预组pThr287．CaMKII蛋白降低(氏O．05)。(3) 万方数据 DS一201对犬房颤的影响：相对于犬房颤组，干预组颤持续时间缩短 DS一201对犬房颤的影响：相对于犬房颤组，干预组颤持续时间缩短 (氏0．01)和房颤发生次数较少(PO．01)。结论： (1)CaMKII参与房 颤的发生。 (2)DS．201可以降低房颤的发生频率以及持续时间。 (3) DS．201可能通过抑制CaMKII基因、蛋白表达以及活性，对房颤起到治疗 作用。 关键词：心房肌，快速起搏，CaMKII，丹参酮II．A磺酸钠 万方数据 E骶cts E骶cts of Sodium Tanshinone II-A Sulfonate on Atrial Fibrillation Through CaMKII Abstract：objective：In the general physiological conditions，the extracellular calcium([Ca2+]。)could get into cells through the L-type calcium channels when myocardial cells are excited，while，the ryanodine receptor 2(RyR2)in sarcoplasmic reticulum(SR)is excited by the Ca外increased in intracellular， which could make the calcium channel in SR open and the Ca2+would then get into the cell matrix from the SR．When the intracellular calcium([Ca2+]i) reachs a high level，the sarcoplasmic reticulum calcium pump will be activated． Most ofthe calcium([Ca2+]i)in the cell could go back to SR through the pump， whereas，just a little amount of[Ca2+]i is excreted out through the sodium- calcium exchanger．If the process above is abnormal，the【Ca2+]i homeostasis broken，the distribution of Ca2+dis