使用AgilentCaptivaEMR-Lipid96孔板进行生物体液样品的蛋白质沉淀.PDFVIP

应用简报 临床研究 使用 Agilent Captiva EMR-Lipid 96 孔板进行生物体液样品的蛋白质沉淀 作者 摘要 Limian Zhao 和 Megan Juck 安捷伦科技公司 蛋白质沉淀技术 (PPT) 是适于 LC/MS/MS 分析的生物体液样品前处理的最常用技术 之一。将蛋白质沉淀应用于生物体液样品，可以从基质中有效去除蛋白质。本应用 简报讨论了生物体液样品 PPT 的重要步骤、考虑因素和注意事项。本文重点介绍使 用 Captiva EMR-Lipid 96 孔板的孔内 PPT ，包括合适的沉淀溶剂、比例、添加剂、生 物体液基质、生物体液样品等分和沉淀溶剂的板上添加顺序、内标 (IS) 添加，以及 板中的样品混合。最后，对使用离心的传统 PPT 和用 Captiva EMR-Lipid 净化后 PPT 的对比结果进行了详细讨论，包括时间、方法性能以及对仪器的影响。 前言 沉淀溶剂与比例 图 1B 表明，样品在 10 °C 下储存 24 小 时后，以 3:1 的比例使用 ACN 可获得澄 蛋白质沉淀 (PPT) 已广泛用于 LC/MS/ 可与水混溶的有机溶剂通用于沉淀蛋白 清的上清液。结果清晰表明，ACN 可比 MS 分析的生物体液样品前处理1。将生 质，通常是 ACN 、MeOH 或二者的混合 MeOH 实现更有效的蛋白质沉淀，如需 物体液样品与 3–5 倍体积可与水混溶的 物1。之前的研究中对采用 ACN 或 MeOH 实现有效的蛋白质去除，有必要将最小沉 溶剂（如乙腈 (ACN)、甲醇 (MeOH) 或二 的 PPT 进行了全面对比2。使用 ACN 进 淀比设为 3:1。然而，更大的沉淀比也会 者的混合物）混合，来实现蛋白质的有效 行 PPT 通常会产生大量黄色凝结沉淀， 导致样品更多的稀释。因此，通常推荐采 去除。有机溶剂的添加破坏了蛋白质的水 而 MeOH 通常会产生更细的白色凝结沉 用 3:1–5:1 的沉淀比，在实现有效蛋白质 化层，降低了蛋白质分子间的排斥力，显 淀（图 1）。上清液的澄清度通常是 PPT 去除的同时仍保持样品的适当稀释。 著降低了蛋白质的溶解度，从而使蛋白质 效率的良好指标，浑浊的上清液表明仍 沉淀出来。之后，可通过离心或过滤去除 然存在未沉淀的蛋白质。图 1A 表明，使 沉淀，并将上清液用于分析。即使由于蛋 用 MeOH 和 ACN 的最小沉淀比分别为 白质结合或受蛋白质结合影响的分析物 3:1 和 2:1 时，可以获得澄清的上清液。 稳定性，导致某些目标分析物可能发生 损失，PPT 方法学仍然提供了快速、简 A 单、经济的样品前处理方法，适用于高通 量样品分析。 Captiva EMR-Lipid 96 孔板可以进行孔内 PPT，然后进行高效过滤以去除沉淀。此 外，EMR-Lipid 吸附剂可在样品过滤期间 与基质中的脂类发生相互作用，得到更 3:1 2:1 1:1 3:1 2:1 1:1 洁净的洗脱液，同时去除了蛋白质和脂 类。本应用简报重点讨论了使用 Captiva EMR-Lipid 96 孔板的这一重要样品前处 乙腈 甲醇 理技术的关键步骤。 B 10 °C 下放置 24 小时后