氨基酸的定量分.pptVIP

* * 氨基酸的定量分析 —甲醛滴定法 一、目的： 初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点 水溶液中的氨基酸为兼性离子，因而不能直接用碱滴定氨基酸的羧基。甲醛可与氨基酸上的—N+H3结合，形成—NH—CH2OH、—N(CH2—OH)2 等羟甲基衍生物，使N+H3上的H+游离出来，这样就可以用碱滴定N+H3放出H+，测出氨基氮，从而计算氨基酸的含量。 二、实验原理 若样品中只含有单一的已知氨基酸，则可由此法滴定的结果算出氨基酸的含量。若样品中含有多种氨基酸（如蛋白质水解液），测不能由此法算出氨基酸的含量。 脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不稳定，导致滴定后结果偏低；酪氨酸含酚基结构，导致滴定结果偏高。 三、材料、试剂与器具 （一）试剂 1、0.5%酚酞酒精溶液 称0.5g酚酞溶于100ml50%酒精中。 2、0.1mol/L甘氨酸溶液 取3.75g甘氨酸溶于500ml蒸馏水。 3、标准0.0200mol/L 氢氧化钠溶液 4、中性甲醛溶液 取甲醛溶液50ml，加0.5%酚酞指示剂约3ml，滴加0.01mol/LNaOH溶液， 使溶液呈微红色，临用前中和。 （二）实验器具 锥形瓶 、碱式滴定管、移液管洗耳球、天平 容量瓶、试剂瓶、量筒、玻棒与烧杯 四、操作步骤 1、取5只50ml锥形瓶，按下表加入试剂。 未知浓度的 氨基酸混合溶液/mL 0.5%酚酞酒精溶液（滴） 水/mL 中性甲醛溶液/mL 0.1mol/L甘氨酸溶液/mL 锥形瓶编号 试剂 0 4 3 1 0 1 0 4 2 1 1 2 0 4 2 1 1 3 1 4 2 1 0 4 1 4 2 1 0 5 2、用0.0200mol/L NaOH溶液滴定至溶液变微红色 注意：滴定管中溶液的初始位置和滴定结束时的位置； 滴定管的使用方法 3、用0.0200mol/L NaOH溶液滴定至溶液变微红色 4、记录每次滴定所用的0.0200mol/L NaOH溶液的 体积 五、计算 标准甘氨酸氨基氮的回收率= VNaoH*0.0200mol/L 理论计算值 *14.008 理论计算值:取用氨基酸的体积乘以浓度,再乘以14.008 VNaoH 两次测定所用氨基酸的体积的平均值