细胞生物学实验.doc

实验1 细胞膜的通透性 【实验目的】 了解分子量、脂溶性大小、电解质和非电解质溶液对细胞膜透性的影响。 【实验原理】 细胞膜在不断变化的环境中，必须保持自身的稳恒状态，才能生存。细胞膜允许一些物质通透，又能降低甚至阻挡另一些物质的通透，所以细胞膜具有选择通透性。水分子可以自由通过细胞膜，当细胞处于低渗液环境时，水分子大量渗到细胞内，使细胞膨胀，进而破裂，血红蛋白释放到介质中，由不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液，这就是溶血现象。 溶血现象可作为测量物质进入红血细胞速度的一种指标。 红细胞置于乙二醇、丙三醇（甘油）、葡萄糖等摩尔浓度的高渗液中，乙二醇等分子进入红血细胞，使细胞内的渗透性活性分子的浓度大为增加，继而导致水的摄入，使细胞膨胀，细胞膜破裂，发生溶血。溶血现象发生的快慢与进入细胞的物质的分子量大小有关。分子量大的进入细胞慢，发生溶血所需时间也长。 非极性化合物易溶于脂溶剂，但在水中溶解度甚小。碳链越长，脂溶性越大。一种化合物在脂溶剂中的溶解度与其在水中溶解度之比，叫分配系数。 各种非电解质溶液，只要单位面积中所含的分子数相同，就具有相同的渗透压。电解质溶液，如氯化钠与葡萄糖分子数相等时，氯化钠产生的渗透压要大的多。具有相同渗透压的某非电解溶液与某电解质溶液浓度之比，叫等渗系数。用ⅰ来表示。 ⅰ= 葡萄糖的等渗摩尔浓度/ 氯化钠的等渗摩尔浓度 发生溶血者为低渗液，所以把发生溶血的前一管溶液的浓度近似视为红细胞等渗。 【实验仪器、材料和试剂】 （一）仪器、用具 小烧杯、试管、试管架、刻度吸管、注射器、秒表 （二）材料 含适量肝素的兔血或鸡血 （三）试剂 1M乙二醇水溶液、1M丙三醇水溶液、1M葡萄糖水溶液、3M甲醇、3M乙醇、3M丙醇、M/8、M/9、M/10、M/12、M/14葡萄糖溶液、M/12、M/13、M/14、M/16、M/18氯化钠溶液 【方法与步骤】 （一）分子量大小对膜通透性的影响 1．在编号的三支试管中，分别用吸管吸入2ml 1M乙二醇，1M丙三醇，1M葡萄糖高渗液。 2．先后分别用注射器滴加两滴血液，用手指按住管口，倒置一次。 3．观察溶血时间，最长延至10min。 4．将实验结果列入如下所示的表格中。 溶液 分子量 溶血时间 1M乙二醇 62 1M丙三醇 92 1M葡萄糖 180 （二）脂溶性大小对细胞膜透性的影响 1．编号的三支试管分别加入2ml 3M的甲醇、乙醇、丙醇溶液。 2．分别先后加入两滴血液，按住管口倒置一次。 3．观察溶血时间。 4．将实验结果记入如下所示的表格中。 溶液 分子量 分配系数 溶血时间 3M甲醇 32.04 0.0097 3M乙醇 46.07 0.0357 3M丙醇 58.0 0.156 （三）电解质和非电解质溶液对细胞膜透性的影响 1．将试管编号，注明溶质名称及摩尔浓度。 2．按编号分别加入不同浓度的葡萄糖及氯化钠溶液 2ml。 3．每管各加入两滴血液，按住管口，倒置一次。 4．室温放置15min ，观察发生溶血的浓度，确定等渗浓度。 5．按下表记录实验结果。 溶液 摩尔浓度 M/8 M/9 M/10 M/12 M/13 M/14 M/16 M/18 葡萄糖 氯化钠 6．计算等渗摩尔系数 实验2 鸡红细胞的体外融合 【实验目的】 1．了解聚乙二醇（PEG）诱导体外细胞融合的基本原理。 2．通过PEG诱导鸡红细胞之间的融合实验，初步掌握细胞融合的基本方法。 【实验原理】 细胞融合（cell fusion）又称体细胞杂交，是指用人工方法使两个或两个以上的体细胞融合成异核体细胞，随后，异核体同步进入有丝分裂，核膜崩溃，来自两个亲本细胞的基因组合在一起形成只含有一个细胞核的杂种细胞（hybrid cell）。细胞融合技术是研究细胞遗传、基因定位、细胞免疫、病毒和肿瘤的重要手段。依据融合过程采用的助融剂的不同，细胞融合可分为：（1）病毒诱导的细胞融合，如：仙台病毒（hemagglutinating virus of Japan，HVJ）；（2）化学因子诱导的细胞融合，如：聚乙二醇（polyethyleneglycol，PEG）；（3）电场诱导的细胞融合；（4）激光诱导的细胞融合。 PEG是乙二醇的多聚化合物，存在一系列不同分子质量的多聚体。PEG可改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处脂类分子发生疏散和重组，引起细胞融合。该方法应用分子质量为400—6000的PEG溶液引起细胞的聚集和粘连，产生高频率的细胞融合。融合的频率和活力与所用PEG的分子质量、浓度、作用时间、细胞的生理状态与密度等有关。 【实验仪器、材料和试剂】 （一）仪器、用具 刻度离心管