多功能p100蛋白对细胞周期的调控机制研究基础医学;免疫学专业论文.docxVIP

天津医科大学硕士研究生论文中文摘要 天津医科大学硕士研究生论文 中文摘要 研究目的：细胞周期是细胞生命活动的基本特征。细胞通过周期时相的变迁完 成个体的发育和自我的更新，其核心内容为DNA的复制以及相关蛋白时序性的 转录表达。p100蛋白是一种多功能蛋白，不但可以作为转录共激活因子，与若 j 干转录因子相互作用激活转录；在转录后的调控中，p100蛋白通过参与 pre．mRNA剪接，RNAi等环节发挥重要作用；p100蛋白还与和细胞周期密切相 关的核仁存在共定位现象；另外，在一些临床疾病的研究中，发现p100在肿瘤 的发生发展中扮演重要角色。鉴于两者均与基因转录、pre．mRNA剪接加工、核 仁以及肿瘤的发生密切相关，我们推测p100蛋白有可能参与细胞周期的调控， 从而对细胞的生物学行为产生影响。本文旨在研究p100对细胞周期的影响，进 而探讨其调控细胞周期的分子机制。 方法：本课题分三部分进行，第一部分研究不同细胞群中p100的表达。该部分 主要从两方面研究，一方面，采用细胞分离技术，于白膜中分离淋巴细胞和粒 细胞，检测两种细胞群中p100的表达情况；另一方面，取不同的组织，观察不 同增殖能力的细胞群间p100的表达差异。第二部分，改变p100的表达水平， 研究p100对细胞周期分布及同步化释放后再分布的影响，同时检测细胞周期调 控网络中其他周期蛋白的变化，探讨其调控细胞周期的分子机制。第三部分， 采用细胞同步化技术，研究p100在不同细胞周期的特点。该部分主要从三方面 研究，第一通过WB与PCR技术检测p100在不同周期时相的表达；第二采用 免疫沉淀技术，检测不同周期p100蛋白的修饰；第三采用免疫荧光技术观察不 同周期p100的胞内定位。 投 【～ 结果：①淋巴细胞中p100高表达，粒细胞中p100低表达； ②增殖细胞群(G1期细胞)肿瘤细胞中，p100高表达；暂不增殖细胞群 (GO期细胞)肝、脾、肾组织中，p100高表达；终末细胞群粒细胞、肌细胞、 神经组织中，p100低表达。 ③抑制p100表达，G1期细胞比例增加，S期细胞比例降低；过表达p100， G1期细胞比例降低，S期细胞比例增加。 天津医科大学硕士研究生论文④抑制p100表达，将细胞由G1／S交界期及G2／M期释放，与对照组及过 天津医科大学硕士研究生论文 ④抑制p100表达，将细胞由G1／S交界期及G2／M期释放，与对照组及过 表达组相比，细胞重新进入细胞周期的速度减慢。 ⑤将细胞同步化于不同周期，发现p100蛋白可表达于细胞周期各个阶段， 以G1／S期表达水平较低； ⑥通过免疫沉淀富集p100蛋白，检测其磷酸化水平，结果显示当细胞阻 滞于G1／S期，p100蛋白磷酸化水平明显降低。 ⑦免疫荧光观察，p100蛋白在不同周期状态下的分布呈现动态变化，与 核仁在细胞周期的分布相一致。 结论：①在细胞周期活跃的细胞群中，p100高表达；在终末期细胞群中，p100 低表达。说明p100蛋白与细胞周期特性密切相关。 t至)p100蛋白可促进细胞周期进程，且主要是促进G1期向S期的周期进 程。 (耍)p100蛋白可表达于细胞周期各个阶段，以G1／S期表达水平较低，且磷 酸化水平明显降低。进一步说明p100对细胞周期的调控发生在G1／S期，提示 p100可能通过磷酸化状态的改变发挥作用。 (至)p100蛋白在不同周期时相的分布呈动态变化，与核仁的周期分布相一 致。提示p100蛋白可能与核仁协同作用参与核糖体的形成，调控细胞周期。 关键词：p100蛋白细胞周期细胞周期调控细胞同步化 II 天津医科大学硕士研究生论文Abst 天津医科大学硕士研究生论文 Abst ract Objective：The eell cycle is the most essential mechanism by which all living things reproduce．It’S basic function is to duplicate accurately the vast amount of DNA in the chromosomes and then segregate the copies precisely into two genetically identical daughter cells．p l 00 is a multifunctional protein．It call participated in the gene transcriptional regulation of many transcription factors as a coactivator,and increase their transcriptional activity．Furt