改良大鼠肺微血管内皮细胞原代培养.PDFVIP

中华损伤与修复杂志(电子版)2o14年第9卷第 1期OlinJlnit~V r lWmmd} (HeemodcFairly)．Fehmrv2014．Vol9．No．1 ·27 · ． 论 著 ． 改 良大 鼠肺微血管内皮细胞原代培养 技术及细胞鉴定 刘勇军 王萍萍 马婕 欧阳彬 陈娟 管向东 作者简介：刘勇军，男，1979年生，医学博士学位，主治医师，现在中山大 学附属第一医院重症医学科，主要研究方向：脓毒症、休克、多器官功能衰竭。 现已发表相关文章10余篇，其中SCI收录2篇，获得国家 自然科学基金项目 2项，省厅级项 目1项。 【摘要】 目的 改进大鼠肺微血管内皮细胞的原代培养方法，并对所培养的原代细胞进行鉴 定。方法 应用SD大鼠的外周肺组织，进行大 鼠肺微血管内皮细胞的原代培养。从动物选取、取 材、肺灌注、植块贴壁、培养基及添加物的选择等方面对肺微血管内皮细胞原代培养技术方法进行改 进。从细胞形态学特征，免疫组织化学检测血管内皮细胞表面标志物 (CD31抗原和Ⅷ因子相关抗原 的表达)，荧光显微镜观察异硫氰酸荧光标记植物凝集素与肺微血管内皮细胞特异性结合情况等 方面鉴定所培养的肺微血管内皮细胞。流式细胞仪检测细胞纯度，噻唑蓝测量细胞生长曲线。结果 原代培养肺微血管内皮细胞成多角形 ，融合为单层后呈典型的鹅卵石或铺路石样生长 ，传代培养后可 变为梭形呈漩涡样生长或聚集生长。免疫组织化学显示细胞 CD31和Ⅷ因子相关抗原的表达阳性； 异硫氰酸荧光标记植物凝集素结合试验阳性。细胞生长状态良好、细胞纯度达93．2％。结论 改进 后的原代培养方法简便、可靠 ，获得的肺微血管内皮细胞污染少、纯度高，状态良好 ，保持了内皮细胞 的结构和特性。 【关键词】 内皮细胞；微血管；肺；细胞，培养的；细胞鉴定； 免疫组织化学 Improventmentofmethod primary cultivation and identification of ratpulmonary mierovascular endohtelialcells LiuYongjun，WangPingping，Ma．1ie，OuyangBin，ChenJuan，GuanXiangdong． Depaamentofspinalintensivecareunit，theFirstAffiliatedHospitalofSunYatS·enUnivemi~，Guangzhou 510080，China Correspondingauthor：GuanXiangdong ，Email：carlg@163．con A【bstract】 Objective Toimprovethemethodforprimarycultivationofratpulmonarymicrovascular endothelialcells(PMEVCs)andidentifytheprimarycultivatedcells．Methods PMVECswerederived from peripheral lung tissueofSprague-Dawleyrats．Primary cultivationmethodwasimproved from the proceduresofanimal selection，lungtissueperfusion，tissuepiecepasting，culturemedium selectionandso on．Inverted microscopewasused to observemorphological characteristicsofpulmonarymicrovascular endothelialcells．ImmunohistochemicalstainingofrexpressionofⅧ一relatedantigenandCD31．andobserved byfluorescencemicroscopeforbindingwithlectinfromBSI(FITC-BSIbindingaway)toidentifypulmonary mierovaseularendothelial cells．T