病原细菌检验基础的知识.pptVIP

病原细菌检验基础知识 天津市动物疫病预防控制中心 郭立力 一.概念 自然界中有一大类个体微小的生物，统称微生物。其中有一小部分对人或动植物有害，也可引起传染病，这类微生物称为病原微生物。 细菌：细菌是一种单细胞微生物，个体微小，需要借用显微镜才能观察到。 非致病菌：无致病性 致病菌：条件性致病菌、非条件性致病菌 1.细菌的基本形态及排列 1.1细菌的形态：细菌的外部形态比较简单，仅有三种主要类型： 球状、杆状、螺旋状，故将细菌分为球菌、杆菌和螺旋菌。 1.2 排列方式：细菌的排列方式是由细菌的繁殖来决定的。细菌的繁殖方式就是简单的裂殖，1变2个、2个变4个。 球菌：多数球菌为正圆形，根据分裂方向及分裂后的相连情况又可分为双球菌、链球菌、四联球菌、八叠球菌及葡萄球菌。 杆菌：菌体呈杆状，杆菌的分裂方向只有一个，故可分为单杆菌、双杆菌和链杆菌。 螺旋菌：菌体呈弯曲或螺旋状，两端圆或尖。 2.细菌的大小 各种细菌的大小，有一定的差别，长的可达80微米，短的仅0.2微米。细菌的大小，以生长在最适宜的温度和培养基中的年轻培养物为标准的。培养条件、染色方法、制片方法不同，菌体大小也略有差异。 3.细菌的结构 细菌细胞很小，但结构复杂。 基本结构：细胞壁、细胞质膜、细胞质、细胞核 特殊结构：某些细菌具有特殊的结构，如荚膜、芽孢、鞭毛 二.细菌的基本检验技术 1.细菌的形态学检验 形态学检查技术是细菌检验极为重要的手段之一，它有利于对细菌的初步认识，也是决定是否进行分离培养及生化反应鉴定的重要步骤，有时可通过形态学检查得到初步诊断，如炭疽等。 1.1染色镜检 细菌是无色、半透明、单细胞的微小个体，折光性弱，在显微镜下只能看见大致轮廓，给研究细菌形态、排列、结构带来一定困难。为此，用一些染料将细菌染上不同颜色后，载明视野显微镜下就可以观察到细菌的内部、外部结构及特殊构造。 简单染色法：只用一种染料染色，只能观察细菌的形态，但不能鉴别细菌； 鉴别染色法：采用两种以上染料染色，能够鉴别细菌和观察细菌的特殊构造，如革兰氏染色法、抗酸染色法、特殊染色法。 1.1.1 制片及染片 无论采用哪种染色方法，染色标本的制作过程是基本相同的。 抹片：细菌培养物、体液（脓汁、血液、渗出液）、组织（心、肝、脾）。 干燥：置空气中自然干燥 固定：将干燥好的片子经过加热或加化学试剂进行固定。固定目的是杀死细菌，改变其对染料的通透性，使之容易着色；固定原生质及细胞的其它结构；使细菌固定在玻片上，染色冲洗时不易被冲掉。 染色：普通染色、特殊染色 1.1.2注意事项 抹片时一定要薄； 一定要自然干燥，不可用火焰； 火焰固定时温度不可过高； 用水冲洗时，水流不可过大； 使用的载玻片要干净、无油。1-2%盐酸浸泡或用酒精棉球擦拭干净。 1.2直接涂片镜检 主要用于检查细菌的运动力。最常用的有湿片法、悬滴法。 注意事项： 取菌液要适量，不可外溢，不要产生气泡； 一般不用油镜； 缩小光圈，下降聚光镜，造成一个光线较暗的环境； 避免环境污染。 2.细菌的分离培养 细菌分离培养是细菌学的重要步骤。不同菌类培养所需要的条件及生长特性亦各有差异。有在通常条件下即可生长繁殖的需氧菌和有氧或无氧环境中都能生长的兼性厌氧菌；也有在无氧环境中才能生长的厌氧菌；少数菌尚需培养在适量的二氧化碳环境中才能生长。细菌分离培养的方法很多，下面着重介绍常用的几种方法。 2.1 接种方法 2.1.1平板划线接种法：平板划线接种是细菌分离培养的常用技术，主要使标本或培养物中的混合细菌能在培养基表面分散生长形成单个菌落。 连续划线分离法：接种环灭菌后挑取组织或菌液少许呈45度角，在平板1/5处轻轻涂布，然后左右来回以曲线形成划线接种。 分区划线分离法：接种环于平板内分划五区，每划完一个区域烧灼环一次。 2.1.2斜面接种法 保存菌种。 2.1.3穿刺接种法 多用于保存菌种观察动力及做厌氧培养，亦可用于观察细菌对糖类的分解反应。 2.1.4倾注平板培养法 细菌计数。 2.2培养方法 2.2.1一般培养法（又称需氧培养法） 将已接种 好的平板、斜面和液体培养基等，直接置35～37℃孵育箱进行培养。 2.2.2二氧化碳培养法 将某些细菌置于含有CO2环境中35～37℃进行培养。 2.2.3厌氧培养法 厌氧罐法、气袋法、气体