trim13参与hek293t细胞自噬及表达变化的研究临床检验诊断学专业论文.docxVIP

大连医科大学硕士学位论文目 大连医科大学硕士学位论文 目 录 一、摘要 1 (一)中文摘要 1 (二)英文摘要 3 二、正文 5 (一)前言(一)月U吾 55 (二)材料和方法 6 1．材料 6 1．1细胞培养材料及来源 6 1．2主要试剂及来源 6 1．3主要仪器及来源 7 1．4相关引物和抗体 8 2．方法 9 2．1 细胞培养 9 2．2建立白噬细胞模型 9 2．3 siRNA敲除细胞TRIMl3 9 2．4流式细胞技术检测转染效率 9 2．5 共聚焦显微镜检测转染效率 lO 2．6 Real Time PCR法检测mRNA表达水平 10 2．7 Western blot方法检测蛋白表达水平 12 3．统计学处理 14 万方数据 大连医科大学硕士学位论文(三)结果 大连医科大学硕士学位论文 (三)结果 14 1．自噬组与对照组细胞的LC3．II在基因和蛋白水平的差异性 表达 1 4 2．自噬组与对照组细胞的TRIMl3在基因和蛋白水平的差异 性表达 1 5 3．敲除TRIMl 3后，白噬对照组、白噬空白组与白噬敲除 TRIM 1 3组细胞的LC 3．II在基因和蛋白水平的差异性表 】：；!12‘。‘‘。。。‘‘‘‘‘。‘‘。。‘‘‘’。·········。········································16 (四)讨论 1 8 (五)结论 20 (六)参考文献 2l 三、综述 23 (一)综述 24 (二)参考文献 30 四、致谢 34 万方数据 大连医科大学硕士学位论文TR 大连医科大学硕士学位论文 TR l M1 3参与HEK293T细胞自噬及表达变化的研究 硕士生姓名：王涛 指导教师：王晶 教授 指导小组：张风华教授 专业名称：临床检验诊断学 摘要 目的：TRIM蛋白是一种结构上较为保守的三重基序蛋白，它的三个保守结构 域对其功能十分重要。已经有大量研究表明TRIM蛋白参与了细胞凋亡、神经退 行性病变、机体免疫应答、调控肿瘤生长和细胞对病毒应答等多种细胞生理过程。 TRIM家族的最新研究表明其与HIV病毒感染、白血病、帕金森氏病、路易体痴 呆及肺癌等疾病有着密切的联系。白噬是由溶酶体介导，降解蛋白质和细胞器的 一种保守的保护性细胞过程，它能够降解和回收细胞残片，与防止感染、癌症、 细胞老化和神经退行性病变等病理状态有关。像亨廷顿氏、帕金斯、肌萎缩性脊 髓侧索硬化症、阿尔茨海默病和糖尿病等疾病，都与细胞自噬相关。TRIMl3，又 称为RFP2，属于TRIM家族一员，定位于内质网，但是对于TRIMl3的细胞功能 了解相对较少。有文献表明，TRIMl3不仅和细胞内蛋白降解有关，也与退行性神 经病变相关，但是否是由于参与细胞自噬而引起此类疾病，还需进一步调查。本 文对TRIMl3与自噬进行了相关研究，目的是确定TRIMl3在正常细胞和自噬细 胞中的表达是否具有差异性，以及明确TRIMl3与细胞自噬是否具有相关性。本 研究对以后TRIMl3的功能分析提供参考，也对进一步分析TRIM蛋白相关疾病 提供实验依据，丰富了细胞自噬过程的发生机制。 方法： (1)通过雷帕霉素诱导HEK293T细胞，建立自噬细胞模型。 (2)采用real．time PCR方法和Western blot方法比较自噬组与对照组的TRIMl3 万方数据 大连医科大学硕士学位论文和LC3．II的基因和蛋白表达水平。 大连医科大学硕士学位论文 和LC3．II的基因和蛋白表达水平。 (3)通过转入siRNA，特异性下调TRIMl3，进而建立敲除TRIMl3的自噬细 胞模型。 (4)采用real-time PCR方法和Western blot方法比较自噬对照组与自噬敲除 TRIMl3组中，LC3．II的基因和蛋白表达水平。 结果： (1)与对照组细胞比较，自噬细胞组LC3一II的基因和蛋白表达量明显上调(P 0．05)。 (2)与对照组细胞比较，自噬细胞组TRIMl3的基因和蛋白表达量明显下调(P 0．05)。 (3)与自噬对照组细胞和自噬空白组细胞比较，自噬敲除TRIMl3组的LC3．II 的基因和蛋白表达水平明显差异性(PO．05)，即，TRIMl3敲除后，细胞自噬程 度减弱。 结论： (1)自噬细胞中的TRIMl3含量较正常细胞表达含量明显降低。 (2)TRIMl3参与HEK293T细胞自噬，有可能是在细胞自噬过程中被消耗。 关键词：TRIMl3 自噬HEK293T细胞 万方数据 大连医科大学硕士学位论文The 大连医科大学硕士学位论文 The implication of TRIMl3 on autophagy in HEK293T cells Master degree candidate：Tao Wang Supe