实验一 蛋白质及氨基酸显色反应(验证).pptVIP

实验一 蛋白质及氨基酸的显色反应 主讲:张丽霞 Department of life science 实验一、 蛋白质及氨基酸的显色反应 目的和要求 1、学习和了解常用的几种鉴定蛋白质与氨基酸的方法。 2、进一步认识氨基酸是蛋白质的基本组成单位。 Ⅰ、双缩脲反应 (Biurea reaction) 原理: 双缩脲反应:在碱性条件下，双缩脲与二价铜离子作用，生成紫红色配合物的反应。当加热至180℃左右时，两分子尿素缩合脱去一分子氨，生成双缩脲。在肽和蛋白质分子中具有肽键，其结构与双缩脲类似，也能发生此反应，生成蓝紫色或紫红色的配合物。该反应常用于蛋白质的定性或定量测定。 紫红色铜双缩脲复合物分子结构为： 蛋白质和多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。此反应所产生颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关。 操作步骤 一、取少量尿素结晶，放入干燥试管中，用微火加热使尿素熔化。熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。冷却后，加10%NaOH溶液约1mL，振荡混匀，再加入1%CuSO４溶液1滴，振荡之。观察出现的粉红颜色。避免添加过量硫酸铜，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。 二、取另一支试管，加1mL卵清蛋白溶液和10%氢氧化钠溶液2mL，摇匀，再加1%硫酸铜溶液两滴，随加随摇，观察紫