科研训练-内蒙古大学生命科学学院.DOCVIP

生命科学学院 本科生能力提高项目（科研训练）基金 子课题概要 申请类别： 指南项目√ 开放项目□ 教师姓名： 苏慧敏 研究方向： 分子遗传学 课题名称: 绒山羊GDNF蛋白多克隆抗体的制备及睾丸Sertoli细胞的鉴定 合作指导教师： 吴应积 拟接收本科生年级和人数： 07级、08级 2-3人 研究项目介绍 背景知识简介 （或训练内容） 胶质细胞源性神经营养因子（glial cell derived neurotrophic factor，GDNF）是转化生长因子 -β超家族的一个成员，对精原干细胞（spermatogonial stem cells，SSC）自我更新分化有重要调节作用。在睾丸组织中， Sertoli细胞分泌产生GDNF，作用于精原干细胞表面的GFRα1/RET复合受体，GDNF 低水平表达的小鼠不能生育，曲细精管萎缩，精子生成量大大降低，睾丸萎缩；而高水平表达GDNF则会发生未分化的精原干细胞的富集，可引起睾丸瘤。高剂量的GDNF诱导小鼠、大鼠、牛的精原干细胞增殖富集，低剂量的GDNF诱导其分化。最新研究发现,GDNF与FGF2在体内可以引起分化的精原细胞重编程逆向恢复为为原始生殖细胞,提示GDNF对精原干细胞更新分化的复杂调控作用。目前国内外关于GDNF/GFRα1信号通路对精原细胞自我更新与分化调控的研究主要集中于啮齿动物，对于人和家畜的研究报道还很少，还未见到山羊GDNF/GFRα1信号通路研究的相关报道。由于不同哺乳动物的精原细胞发育过程存在着差异，该信号通路在山羊精子发生过程中是否也有类似的作用还有待于实验的证明。进行 gGDNF表达水平变化的研究对我区畜牧业发展也具有重要意义。 现有研究基础 已首次成功分离克隆得到gGDNF基因cDNA,并构建好gGDNF真核、原核表达载体，并在大肠杆菌里成功表达。 获得青春前期不同发育阶段绒山羊睾丸组织样本，可用于RNA转录水平、蛋白质表达水平差异分析 已成功分离培养绒山羊睾丸Sertoli细胞。 研究摘要 本研究通过在E.coli中诱导表达并纯化绒山羊gGDNF蛋白，免疫小鼠制作鼠抗山羊GDNF多克隆抗体。通过组织切片形态学观察、碱性磷酸酶染色、抗体原位杂交，western bloting，研究在绒山羊发育过程中gGDNF的表达、分布及对精原干细胞的影响。同时对体外培养的绒山羊睾丸Sertoli细胞进行gGDNF蛋白免疫荧光染色鉴定。 进度计划 2009.12－2010.5在E.coli中高效表达并纯化gGDNF蛋白，制备鼠抗山羊gGDNF多克隆抗体。 2010．6－9通过Western blotting等方法检测山羊睾丸组织中gGDNF的表达。 2010.10-2010.4制备绒山羊睾丸组织切片，并进行HE染色、碱性磷酸酶染色、免疫组化分析。 2010.5-2010.12 体外培养绒山羊睾丸Sertoli细胞进行gGDNF蛋白免疫荧光染色鉴定 预期成果形式 至少发表一篇论文 项目来源说明 如说明已获资助或正在申请中的项目名称、时间和经费 内蒙古大学本科生能力提高项目（科研训练）子课题：绒山羊GDNF基因的克隆与表达 ，2008.4-2010.5 注：本表供拟承担指南项目或开放项目的指导教师填写，并向学生公布。