猪来源关节软骨脱细胞支架的生物安全性研究.pdf

中国医药生物技术 2010 年 2 月第 5 卷第 1 期 Chin Med Biotechnol, February 2010, Vol. 5, No. 1 19 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2010.01.005 ·论著· 猪来源关节软骨脱细胞支架的 生物安全性研究 鹿亮，郭全义，杨启友，袁玫，张莉，黄靖香，赵斌，彭江，许文静，卢世璧 【摘要】 GB/T1688622003 标准[3]对猪来源关节软骨 ECM 目的 评价猪来源关节软骨脱细胞支架的生物安全性。 制备的支架进行生物安全性检测，旨在为组织工程 方法 取猪四肢关节软骨，分别制备脱细胞和未脱细胞软骨 软骨修复软骨缺损的临床应用提供实验依据。 支架。在人软骨细胞中分别加入浓度为 100% 、50%、25% 的 脱细胞软骨支架浸提液[无血清 DMEM 培养液与支架表 1 材料与方法 面积按 1 ml ：（3 ~ 6 ）cm2 比例混合，37 ℃ 静置 72 h]， 1.1 材料 计算相对增殖率，判定其体外细胞毒性。0.9% NaCl 与支架 软骨细胞来源于解放军总医院膝关节置换手 表面积按 1 ml ：（3 ~ 6 ）cm2 比例混合，37 ℃ 静置 72 h 制 术切除的关节软骨标本（获得患者知情同意）。 备脱细胞软骨支架浸提液，分别用于全身急性毒性实验（小 13 个月龄的鲜猪四肢购自北京市屠宰场。健康新 白鼠）、溶血实验、热原检测实验、皮内刺激实验（大白兔）， 西兰大白兔[体重 2.0 ~ 2.5 kg ，合格证号：SCXK 分别观察其体内毒性、溶血程度、热原和刺激情况。在大白 （京 2007-0003 ）]和雌性、健康小白鼠[6 ~ 8 周龄、 兔体内分别埋植脱细胞软骨支架与未脱细胞软骨支架，观察 体重 20 ~ 25 g ，合格证号：SCXK （京 2006-2009 ）] 炎症反应和细胞免疫情况。 由解放军总医院动物实验中心提供，均饲养于清洁 结果 猪脱细胞软骨支架浸提液对细胞生长无抑制作用，无 普通环境中。胎牛血清（FBS ）、DMEM 培养液、 细胞毒性。注射支架浸提液后小白鼠一般情况良好，无全身 二甲基亚砜（dimethylsulfoxde，DMSO ）、MTT 购 急性毒性反应。支架浸提液溶血程度为 1.3% ，无溶血作用。 自美国 Sigma 公司，内毒素检测试剂盒（Cat#. 支架浸提液无热原存在且原发刺激指数为 0 分，皮内刺激 295-51301 ）购自日本 Wako 公司。MK3 型酶联免 实验阴性。脱细胞软骨支架与未脱细胞软骨支架相比免疫原 疫检测仪购自美国 Thermo 公司，DU640 型紫外 性小，无炎症反应和淋巴细胞浸润。 分光光度计购自美国 Beckman 公司。 1.2 方法 结论 猪来源关节软骨脱细胞支架具有良好的生物相容性， 1.2.1 支架的制备 将有可能成为理想的天然生物材料，具有良好的应用前景。 脱细胞软骨支架的制备 参照文献[4 ] 【关键词】 组织工程； 生物相容性材料； 细胞壁支 的方法，切取猪四肢关节软骨，0 ~ 4 ℃ 浸泡于含苯 架； 细胞外基质 甲基磺酰氟的 PBS 中，超微湿法粉碎，充分稀释 中国医药生物技术, 2010, 5(1):19-23