色谱大讲堂大极性化合分析最佳解决方案.pdfVIP

广州太玮生物科技有限公司 020 色谱大讲堂 第十讲 大极性化合分析最佳解决方案 对大极性小分子化合物的研究，在医药、生化、 常用溶剂洗脱强弱顺序：乙腈＜异丙醇＜乙醇 代谢组学、生命科学、天然产物研究、食品安全检 ＜甲醇＜水 测、蛋白质组学、环境保护等领域关注度的提升， 缓冲盐：大多数 HILIC色谱柱建议缓冲盐浓度 对大极性化合物的检测需求也就越来越受重视。然 在流动相中的浓度要维持5mM以上（比如乙腈-50mM 而，对液相色谱分析技术而言，最常用、研究最透 醋酸铵90:10，则流动相中缓冲盐浓度为5mM），否 彻的反相方法在这方面显然是块短板；由于溶解性 则会影响保留时间的稳定性。德国 Merck 公司的 的问题（大极性化合物通常难溶于典型正相流动相 Zic-HILIC 色谱柱由于具有更好的绑水能力，即便 体系），正相方法也受到严重局限；离子交换色谱 只有很低的缓冲盐浓度，也有很好的稳定性。常用 法和离子对色谱法很难和质谱检测器兼容，无法满 的缓冲盐有甲酸铵和醋酸铵，也可以用磷酸盐，但 足高精度分析的要求。 用磷酸盐时有机相的比例不能太大，否会因为磷酸 因此，对大极性化合物的色谱分析，最佳的解 盐的溶解度不好而析出结晶，堵塞仪器流路和色谱 决方案便是——HILIC, Hydrophilic Interaction 柱！Zic-HILIC 色谱柱也可单纯加酸，也能维持非 Liquid Chromatography,亲水作用色谱法。 常好的重现性。 1、 什么是HILIC？ 4、 检测器的匹配。 HILIC,最早于1990年由美国科学家Andrew 4.1 紫外检测器。很多大极性的化合物没有 Alpert命名，其实质上的固定相是水，分离机制是 紫外吸收，而甲酸铵和醋酸铵的截止波 “分配作用”而不是传统色谱柱的“吸附作用”。 长很大，难以使用末端吸收。使用磷酸 使用的典型流动相是类似于反相体系的乙腈-缓冲 盐截止波长很短，可以使用末端吸收， 盐系统，一般化合物极性越大，保留越强，增加流 但必须在 5mM 以上浓度时很难确保能够 动相体系有机相的比例，保留增强，所以，也有人 完全溶解于高比例有机相的流动相，所 称这种色谱模式为“反反相色谱”。HILIC色谱， 以实际上没有应用意义。对于那些带有 常用的键合相有硅胶、氨基、二醇基、酰胺基和季 紫外吸收基团的化合物，可以用紫外检 铵+磺酸基，如下图： 测器。或者使用 ZIC HILIC 色谱柱，使 用低浓度的磷酸盐或单纯用酸，就可以 满足末端吸收的要求。 4.2 蒸发光和质谱检测器。甲酸铵和醋酸铵 都非常适合使用。由于流动相含有高比