结核分枝杆菌ESAT26抗原适体的筛选与亲和性分析.pdf

中华 临床医师杂志( 电子版) 200 7 年 10 月第 1 卷第 5 期 Chin J Cl inicians( E lectr onic Versi on ) , October 15 , 2007 , Vol. 1, No. 5 ·3 8 3 · ·实 验 研 究 · 结 核 分 枝 杆 菌 E SAT6 抗 原 适 体 的 筛 选 与 亲 和 性 分 析 马占忠 秦莲花 王玉炯 胡忠义 【摘要 】 目的 通过建立指数级富集配体的系统进化技术( SELEX) , 筛选结核分枝杆菌 E SAT 6 抗原适体的方法, 获得 ESAT6 的 高亲和 性适 体, 为 结核 病 诊 断和 治疗 试 剂 的开 发 奠 定 基础 。 方法 体外构建一个长度为 78 个碱基的随机单链 DNA( ssDNA) 文库, 以微孔板为筛选介质, SELEX 技术筛选获得 ESAT6 的适体库, 将适体库克隆、测序, 用 DNAMAN 软件对其结构进行分析, 利用生物 素链亲和素辣根过氧化物酶 显色 系统测 定亲和 力, 找 出高亲和 性适体 。结 果 经过 13 轮 筛选, ssDNA文库与 ESAT6 亲和力从 0257 提高到 1163 , 且 12 轮后 A 值趋于平衡, 克隆、测序获得 E SAT6 的高亲和 性适体, 其 中适体 A10 亲和力最高, 达到 1515 , 且与 CFP10ESAT6 融合 蛋 白无 交叉反应 。 二级结构显示, 口袋和茎环结构可 能是适体与 ESAT6 结合 的结构基础 。结 论 成功建立 了 SELEX 筛选技术, 并初步获得 了 E SAT6 的高亲和性适体 。 【关键词 】 分枝杆菌, 结核; E SAT6 ; 指数级富集配体的系统进化技术; 适体 Scr een in g an d a ffin ity an alysis o f a p tam er s to E SAT 6 p r ot ein fr om M ycob acter iu m t uber cu losis MA Zh anzhong, QIN Lianhua , WANG Yujiong , HU Zhongyi .  Shan ghai P ulmona ry Disease Hospital Affiliated to Tongji University, TB Key Laborator y of Shanghai, Shanghai 2 00433 , Chin a Corresponding au thor: HU Zhon gyi, Email: shtblab@ 163 . com 【Ab str a ct 】 Obj ective To set up a meth od of systematic evolution of ligand s by exponential enrich ment ( SELEX ) for screening and obtain the highaffinity aptamers to E SAT6 p rotein from Mycobacterium tubercu losis, lay a foundation of develop ing a diagn ostic and therap eutic reagen t of TB. M eth od s A 78 nt random singlestrand DNA ( ssDNA ) libr ary was d esigned and synthesized in vitro. Selected by 9 6 well p late, obtained aptamers to E SAT6 protein by SELEX method , the ap tamers was cloned a