环境微生物学第四篇.pptVIP

环境微生物学 主讲教师：崔明超 办 公 室：行政西楼627室 电 话电子信箱：cuimingchao@ 第四篇 微生物监测环境 第16章 环境污染的指示微生物 第17章 污染物生物毒性的微生物学检测方法 第18章 污染物致突变性的微生物检测方法 第19章 微生物监测技术的新发展 第十六章 环境污染的指示微生物 第一节 一般污染指示微生物 第二节 粪便污染指示菌 第三节 其他指示微生物 第一节 一般污染指示微生物 指示微生物：在常规环境监测中，用以指示环境样品污染性质与程度，并评价环境卫生状况的具有代表性的微生物 细菌总数 意义：环境中被测样品在一定条件下培养后所得的1ml或1g检样中所含有的细菌菌落总数；反映环境中异养型细菌的污染从度，也间接反映一般营养性有机物的污染程度 细菌总数 方法 液态与固态对象中的细菌总数：将经过一定倍数稀释的样品悬液，定量接种（倾注或图布）于营养平板，有氧37℃培养48h后观察菌落 细菌总数 空气中的细菌总数： 平板暴露沉降法采用直径9cm平皿在1.2m高处暴露5min，培养计数； 奥氏公式：5min内落在100cm2营养琼脂平板上的细菌数和10L空气中所含的细菌数相同 最小采样量和最小沉降面积（为避免出现“0”粒的概率，确保结果可靠性） 仪器法采用固体撞击式采样器∮ 细菌总数 结果： cfu/ml或cfu/g∮ 细菌总数的卫生标准 生活饮用水100 cfu/ml 室内空气500～1000 /m3 室内空气指示菌以咽喉正常菌丛中的绿色链球菌为最合适，在上呼吸道和空气中较易发现 对方法的评价：相对性 一般计数平板的细菌生长菌落数以30~300个为宜。 霉菌和酵母菌总数 意义：偏酸性好氧条件，存活力强，有机营养物广泛；反映环境的一般性污染 方法：虎红培养基、察氏培养基等；倾注平板法； 25~28℃ 3~5天 结果： cfu/ml或cfu/g 卫生标准： 方法评价：主要适用于霉菌，酵母菌附带生长，均非环境中全部酵母菌 第二节 粪便污染指示菌 粪便污染指示菌的理想条件： 是人畜粪便中的正常菌，且数量较粪便中其他菌为多 受人畜粪便污染的环境中可检出，而未受污染环境无该菌存在 排出至环境后，该菌存活时间与肠道致病菌相当或略长 对氯等消毒剂及其他不良因素的抵抗力略强于肠道致病菌 检出与鉴定方法比较简便迅速 总大肠菌群 是一群能在37℃，24h内发酵乳糖产酸产气，需氧或兼性厌氧的G-无芽孢杆菌 主要包括四个菌属：埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属∮ 方法：多管发酵法、滤膜法 多管发酵法 初发酵：在2个各装有已灭菌的50ml浓乳糖蛋白胨的大发酵瓶中，无菌操作加入水样100ml；在10只含5ml培养基的发酵管中加水样10ml，混匀后37℃培养24h 如无酸及气体产生，为“－”；如有酸和气体，或无气体但有酸产生，为“＋”；如有气体产生，但没产酸，溶液也不浑浊，可能是操作技术问题，须重作检验 平板分离：从阳性管中取液，分别接种在品红亚硫酸钠培养基或伊红美蓝培养基上，注意编号， 37℃培养24h 多管发酵法 如无细菌增殖现象，为“－”；如仅发现芒状、霉状或其他无关菌属的菌落，为“－”；挑取符合下列特征的菌落1/3涂片、G染色、镜检 品红亚硫酸钠培养基：紫红色，具金属光泽；深红色，不带或略带金属光泽；淡红中心色较深 伊红美蓝培养基：深紫黑色，具金属光泽；紫黑色，不带或略带金属光泽；淡紫红色，中心色较深 多管发酵法 复发酵试验：挑取镜检G-无芽孢杆菌的其余部分菌落，接种于含10ml普通浓度乳糖蛋白胨培养基的发酵管中， 37℃培养24h，观察产酸产气 根据复发酵结果，统计出阳性管及瓶数，查表得出总大肠菌群数 多管发酵法 水源水检验时水样稀释10倍，预备15支发酵管，5支装5ml浓培养基，加水样10ml；10支装10ml普通培养基，5支加水样1ml，5支加稀释水样1ml；以后检测同饮用水，根据存在的阳性管数查另外的检数表 滤膜法 比发酵法缩短时间，有可能在24h内完成 孔径0.45~0.65μm，多孔性硝化纤维膜 滤膜灭菌：蒸馏水煮15min×3次 滤器灭菌：酒精棉球火焰灭菌或121℃ 30min 过滤水样：粗糙面向上，过滤水量的确定以培养后滤膜上长出的菌落不多于50个为原则 滤膜法 水样过滤后，继续抽气5s关闭，带菌滤膜置于品红亚硫酸钠培养基上，二者之间不得留有气泡，37℃培养24h 挑取特征菌落染色镜检 G-无芽孢杆菌的穿刺接种到乳糖蛋白胨半固体培养基（预先煮沸排气），37℃培养6～8h，产气者为“＋”，培养基内部形成龟裂状，甚至部分上浮 结果与卫生标准： 大肠菌群数（个/L或个/ml）；饮用水标准：0个/100ml，土壤100个/g 大肠菌群值：水样中可检出1个大肠菌群