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鲁米诺化学发光试剂盒 1. 产品说明 本产品是基于鲁米诺底物的化学发光试剂盒，能够被辣根过氧化物酶 （HR ）催化发光。本 试剂盒优化了底物组成，使用了新型高效增强剂 ，发光强度比传统ECL显色液提高了 30-100 倍，并有效地降低了背景。试剂盒使用新的氧化剂代替不稳定的双氧水，提高了试剂盒的稳 定性 ，室温可稳定放置 1 年。工作液被 HR 催化后，发出特定波长荧光 （400-450 nm ）， 可对 X 光胶片曝光，也可直接使用荧光 CCD 扫描 ，主要应用于Western 检测以及化学发 光免疫检测系统。 2. 试剂盒组成 货号 Solution I Solution II 备注 Smart-ECL Basic 30100 50 mL 50 mL 基本型 30500 250 mL 250 mL Smart-ECL Enhanced H31100 50 mL 50 mL 增强型 H31500 250 mL 250 mL Smart-ECL Super S32100 50 mL 50 mL 超敏型 S32500 250 mL 250 mL 3. 缓冲液配制 一抗工作浓度：0.2-1.0 ug/mL ； HR 标记二抗工作浓度：10-500 ng/mL ，根据二抗效价调整。 2 显色液的使用比例：Solution I : Solution II = 1:1 ；10 cm 转印膜使用 1-2 mL 工作液。 抗体去除液 基本型：0.1M 甘氨酸，HCl 调整 pH 至 2.7 传统型：2% SDS, 0.1M mercaptoethanol, 50mM Tris-HCl, pH 7.0 1 / 4 常州天地人和生物科技有限公司 高效型：6M GnHCl, 0.2% Nonidet -40 (N -40), 0.1M β-mercaptoethanol, 20mM Tris-HCl, pH7.5 4. 操作步骤 根据常规操作转印结束后，进行封闭、一抗孵育、二抗孵育以及必要的洗膜步骤 ，根据膜的 2 大小，按每 10cm 膜使用 1-2mL 工作液，按比例吸取等体积溶液 I 和溶液 II 混匀，配制 成发光检测工作液。用平头镊子将膜取出，膜的下缘轻轻接触吸水纸，去除膜上多余的液体。 用移液器将工作液加到转印膜上，使其均匀覆盖，室温孵育 1-2 分钟 ，此步骤可在洁净保 鲜膜上或塑料盒中完成。 4.1 X 光胶片法 1) 用平头镊子夹起转印膜，膜的下缘轻轻接触吸水纸，去除膜上多余的液体 ，留下少量工 作液，不要让膜完全干燥。膜的蛋白面朝上，包裹于洁净保鲜膜内。轻轻赶出其间的气泡， 用小块透明胶带粘住四角，固定在 X 光片暗盒内。 2) 在暗室中取一张 X 光胶片置于包裹的膜上，合上暗盒，曝光 30 秒至 1 分钟。立即定影、 显影，根据曝光强度，调整下一张 X 光胶片的曝光时间。如果背景过高，可以使用两张 X 光胶片同时压片。 4.2 荧光拍照法 1) 如果需要使用 CCD 拍照，可以将膜放置于工作液中，开机后按照使用说明，将转印膜取 出